位置:成果数据库 > 期刊 > 期刊详情页
Ⅱ型B族链球菌表面免疫相关蛋白基因的克隆和原核表达
  • ISSN号:1004-5503
  • 期刊名称:《中国生物制品学杂志》
  • 时间:0
  • 分类:R730.53[医药卫生—肿瘤;医药卫生—临床医学] R378.911[医药卫生—病原生物学;医药卫生—基础医学]
  • 作者机构:[1]北京儿童医院微生物及免疫室,北京100045, [2]北京大学医学部基础医院病原生物系,北京100083
  • 相关基金:国家自然科学基金资助项目(30371487).
中文摘要:

目的重组表达Ⅱ型B族链球菌表面免疫相关蛋白(Surface immunogenic protein,SIP)基因,为进一步免疫学研究提供目标蛋白.方法用PCR的方法从GBSⅡ型标准株的基因组DNA中扩增出SIP基因,用T/A克隆法将其插入pMD18-T载体,构建原核表达载体pET32a-SIP,用BI21(DE3)/pET系统表达Trix-SIP融合蛋白,SDS-PAGE和质谱分析鉴定表达产物,并对表达蛋白进行初步纯化.结果 PCR扩增产物经测序,证实与GenBank中I a/c型GBS的SIP的基因序列同源性为99%.SDS-PAGE显示,经IPTG诱导后BL21(DE3)/pET32a-SIP总蛋白中出现一条相对分子质量为66 000的新蛋白带.质谱分析和蛋白质库的比较证实其为B族链球菌表面免疫相关蛋白(SIP)的可能性分数为74.结论已成功表达并初步纯化SIP,为SIP在细菌致病中的作用研究以及相关疫苗的制备奠定了基础.

英文摘要:

Objective To express the gene encoding the surface immunogenic protein(SIP) of streptococcus group B and provide target protein for further immunological study. Methods Amplify SIP gene from the genomic DNA of standard GBS strain type Ⅱ by PCR and insert into pMD18-T vector by T/A cloning. Digest the recombinant plasmid with restriction endonuclease Bgl Ⅱ and Hind Ⅲ, and clone the obtained gene fragments into pET32a vector. Transform the constructed recombinant plasmid pET32a-SIP into BI21 (DE3)/pET system for expression of Trix-SIP fusion protein. The expressed product was identified by SDS-PAGE and peptide mass fingerprinting(PMF). Results The homology of amplified SIP gene sequence to that of SIP of GBS type Ia reported in GenBank was 99%. SDS-PAGE showed a protein band with relative molecular weight of 66 000. The probability based mowse score of SIP was 74 by PMF analysis. Conclusion GBS SIP fusion protein was successful expressed. It laid a foundation of study on role of SIP in pathopoiesis of bacteria and development of relevant vaccine.

同期刊论文项目
同项目期刊论文
期刊信息
  • 《粉末涂料与涂装》
  • 主管单位:
  • 主办单位:中国化工学会涂料涂装专业委员会
  • 主编:
  • 地址:上海宋园路135弄21号101室
  • 邮编:200336
  • 邮箱:
  • 电话:021-64068234
  • 国际标准刊号:ISSN:1004-5503
  • 国内统一刊号:ISSN:22-1197/TQ
  • 邮发代号:
  • 获奖情况:
  • 国内外数据库收录:
  • 被引量:43