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一种新的酶切保护PCR分析方法及其在二恶英类化合物检测中的应用

ISSN号：1004-616X
期刊名称：《癌变．畸变．突变》
时间：0
分类：R991[医药卫生—毒理学;医药卫生—药学]
作者机构：[1]华中科技大学同济医学院环境医学研究所，湖北武汉430030
相关基金：国家自然科学基金资助(No.20107002;20377017)

作者：孙晞[1], 李芳[1], 陈启政[1], 孙纳[1], 王小利[1], 严红[1], 徐顺清[1]

关键词：二恶英类化合物, 芳香烃受体, 二恶英反应元件, 外切酶Ⅲ, S1核酸酶

中文摘要：

背景与目的：建立一种灵敏、快速、无放射性污染的生物方法来检测环境样本中的二恶英类化合物。材料与方法：二恶英类化合物可以活化胞浆内芳香烃受体(AhR)使之与一段包含特定序列的双链DNA结合，结合的DNA因受蛋白质保护可抵抗核酸外切酶消化而保留下来，痕量的保留DNA通过PCR检测出来。根据此原理本研究将TCDD溶液加入到含AhR及相关蛋白的细胞溶质中，在体外与含二恶英反应元件的DNA作用形成二恶英-AhR-DNA复合物，用核酸外切酶Exo Ⅲ和S1核酸酶进行消化后作PCR，通过琼脂糖电泳可以检测目的DNA是否存在；同时以有机溶剂DMSO设为对照。结果：在实验组用琼脂糖电泳可以检测到期望大小片段的DNA，而对照组为阴性。结论：该方法可作为环境样本中二恶英污染的生物检测手段，具有灵敏、经济和快速的优点。

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