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人超氧化物歧化酶(SOD)基因的原核表达与蛋白纯化
  • 期刊名称:泉州师范学院学报
  • 时间:2011.7.7
  • 页码:37-40+49
  • 分类:Q575.12[生物学—生物化学]
  • 作者机构:[1]泉州师范学院化学与生命科学学,福建泉州362000, [2]福建农林大学食品科学学院,福建福州350002
  • 相关基金:国家自然科学基金(31072236);福建省教育厅项目(JK2009043)
  • 相关项目:铁及铁蛋白,转铁蛋白在对虾抗WSSV感染中的作用研究
中文摘要:

从人直肠癌细胞株Colo320中提取总RNA,经RT-PCR扩增出SOD基因片段,经限制性内切酶(BamHI,Sinai)酶切后按正确的读码框顺序插入到pGEX-4T-2表达载体上,重组质粒转化大肠杆菌,经菌落PCR和质粒双酶切鉴定、序列测定确认,证实成功地构建了人SOD基因融合表达载体.转化菌经IPTG诱导表达,SDS-PAGE显示有与预期大小约44kD相吻合的融合蛋白带,获得了可溶性表达的目的蛋白,采用Glutathione Sepha—rose4B亲和层析对重组蛋白进行纯化,获得了纯度很高的目的蛋白.

英文摘要:

The SOD gene was cloned by RT-PCR from colon carcinoma cell line Colo320. After digested by BamH I and Sma I, it was inserted into the plasmid pGEX-4T-2 with the right reading frame sequence to construct the expression vector, which can express the fusion protein with GST tag. The fusion protein was expressed after inducing with IPTG and purified for antibody preparation by Glutathione Sepharose affinity chromatography.

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