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pBI121-LyrZ-GFP表达载体的构建及其在和田苜蓿愈伤组织中的转化
  • ISSN号:1674-7968
  • 期刊名称:《农业生物技术学报》
  • 时间:0
  • 分类:S188[农业科学—农业基础科学]
  • 作者机构:[1]甘肃农业大学草业学院,兰州730070, [2]兰州大学生命科学学院,兰州730000
  • 相关基金:基金项目:甘肃省农牧厅农业生物技术研究与应用开发项目(No.GNSW.2007.03)、甘肃省科技攻关重点项目(No.2GS042-A43-013-04)和国家自然科学基金项目(No.30371745)资助.
中文摘要:

将绿色荧光蛋白(GFP)基因片段插入到pBI121-Lyz多克隆区,构建了重组表达载体pBIl21-Lyz-GFP。经SmaⅠ与BamHⅠ双酶切和PCR验证重组质粒,均能得到约750bp的目的片段,通过进一步测序证明,GFP基因已成功地连接到pBI121-Lyz中,且重组质粒连接方向正确。利用冻融法将重组质粒导入根癌农杆菌(Agrobacterium tumenfaciens ) LBA4404,,用叶盘法转化和田苜蓿(Medicago sativa L. cv. Xinjiang Daye),筛选出具有卡那霉素抗性的愈伤组织,经PCR扩增和荧光显微镜检测证明,重组基因已成功地转化到和田苜蓿愈伤组织中。

英文摘要:

The dual gene vector was constructed by inserting GFP gene used as selectable marker into the pBI121-Lyz. The nucleotide sequencing showed that the plasmid pBI121-Lyz-GFP was constructed successfully. Moreover, the recombinant plasmid was introduced into Agrobacterium tumefaciens LBA4404 by freezethaw method, and then transformed into the Medicago sativa L. cv. Xinjiang Daye by leaf disc method. The kanamycin-resistant transformants were obtained by kanamycin screening. And the transgenic calluses of M. sativa cv. Xinjiang Daye were detected by PCR and the observation of GFP gene under the fluorescent microscope upon excitation of blue light. The results showed that the foreign gene was integrated into the recipient genome of M. sativa cv. Xinjiang Daye and expressed normally.

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期刊信息
  • 《农业生物技术学报》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:中华人民共和国教育部
  • 主办单位:中国农业大学
  • 主编:武维华
  • 地址:北京市海淀区圆明园西路2号中国农大生命科学楼1053
  • 邮编:100193
  • 邮箱:nsjxb@cau.edu.cn
  • 电话:010-62733684 62731615
  • 国际标准刊号:ISSN:1674-7968
  • 国内统一刊号:ISSN:11-3342/S
  • 邮发代号:2-367
  • 获奖情况:
  • 在《中国学术期刊评价研究报告》(2009-2010年)...
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),英国农业与生物科学研究中心文摘,美国乌利希期刊指南,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版)
  • 被引量:15081