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甲型鸭肝炎病毒2A蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备

ISSN号：1003-4315
期刊名称：《甘肃农业大学学报》
时间：0
分类：S851.3[农业科学—预防兽医学;农业科学—兽医学;农业科学—畜牧兽医]
作者机构：[1]甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州730070, [2]中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241
相关基金：国家自然科学基金（31270194,31101848,31300141）;农业公益性行业科研专项课题（201003012,201303046）;国家高科技研究发展计划863计划（2011AA10A209）.

作者：胡文[1,2], 孟春春[2], 李传峰[2], 陈宗艳[2], 梁瑞英[2], 李宁[2], 黄云秀[2], 吴润[1], 刘光清[2]

关键词：甲型鸭肝炎病毒, 2A蛋白, 原核表达, 蛋白纯化, 多克隆抗体, DHAV, 2A protein, prokaryotic expression, purification, polyclonal antibody

中文摘要：

采用 RT-PCR方法从甲型鸭肝炎病毒 ZJ-V 株的 RNA 模板中扩增出2A基因,将其克隆到表达载体pET-30（＋）中,经酶切和测序鉴定后转化表达宿主菌 BL21（DE3）细胞中,以 IPTG诱导表达 His-DHAV-2A 融合蛋白。结果表明：目的蛋白在1 mmol/L IPTG诱导4 h的情况下以可溶性形式表达。表达产物经 Ni 柱纯化后获得了高纯度的融合蛋白。以纯化后的 His-DHAV-2A 融合蛋白为抗原免疫白兔制备多抗,Western-blot 试验表明制备的多抗可与目的蛋白发生特异性反应。以上结果说明,DHAV的2A蛋白在大肠杆菌中成功表达,且制备的多抗血清可用于2A蛋白的表达检测。

英文摘要：

Using the total RNA of Duck hepatitis A virus （DHAV）ZJV strain as template,2A gene was amplified by RT-PCR and sub-cloned into pET30a to construct a recombinant prokaryotic expression plasmid pET30a-2A.After sequencing,the recombinant plasmid was transformed into E.coli BL21（DE3）. The transformed bacteria were induced by 1 mmol/L IPTG with 4 hour then the fusion protein was ex-pressed as a soluble.Recombinant protein was purified by Ni-NTA-Resin,and then vaccinated rabbits three times for preparation polyclonal antibody.The results of Western-blot assay indicated the prepared poly-clonal antibody reacted with target protein specificity.These results showed that 2A protein was success-fully expressed in E.coli,and the antiserum could be used for establishment methods for DHAV-2A pro-tein detection.