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SIGIRR对H292细胞Toll样受体4、5、9致炎作用的影响及机制研究
  • ISSN号:1000-8861
  • 期刊名称:《免疫学杂志》
  • 时间:0
  • 分类:R392.11[医药卫生—免疫学;医药卫生—基础医学]
  • 作者机构:[1]中国人民解放军海军总医院呼吸内科,北京100037, [2]第三军医大学新桥医院呼吸内科,重庆400037
  • 相关基金:国家自然科学基金资助项目(30600272).
中文摘要:

目的:构建单免疫球蛋白白细胞介素-1受体相关蛋白(SIGIRR)胞内区酵母双杂交诱饵质粒,并检测其是否存在自激活作用。方法聚合酶链反应(PCR)扩增人SIGIRR胞内区基因片段(480~1230 bp),并将此基因片段重组入pSos载体中,构建诱饵质粒pSos-SIGIRR ,经酶切及测序鉴定构建正确后,将重组质粒与对照质粒共转化感受态酵母菌cdc25H ,接种于25℃SD/Glucose(-UL)和SD/Galactose(-UL)平板以及37℃ SD/Glucose(-UL)和SD/Galactose(-UL)平板上,连续观察6 d酵母菌生长状况;用Western blot法检测目的蛋白表达情况。结果正确构建了人SIGIRR胞内区酵母双杂交诱饵质粒pSos-SIGIRR , pSos-SIGIRR在酵母双杂交系统中无自激活及毒性作用。Western blot结果显示,目的蛋白以170×103的融合蛋白形式表达。结论诱饵质粒pSos-SIGIRR可应用于酵母双杂交系统中,为在人肺互补脱氧核糖核酸(cDNA )文库中寻找与SIGIRR相互作用蛋白奠定了重要基础。

英文摘要:

Objective To construct the bait plasmid of pSos-single immunoglobin IL-1 receptor related protein (SIGIRR) in Cy-toTrap yeast two hybrid system ,and to test its self-activation .Methods The cDNA fragments of SIGIRR(480 -1 230 bp) were amplified from pReceiver-LV19-SIGIRR and ligated into the bait plasmid pSos to generate the plasmid pSos-SIGIRR .The pSos-SI-GIRR was identified by DNA sequencing and dual-site endonuclease digestion .Then the recombinant plasmid and control plasmid were introduced into the yeast cell cdc25H .The transformants were inoculated on plates of 25 ℃ /SD/Glucose(-UL) ,25 ℃/SD/Ga-lactose(-UL) ,37 ℃ /SD/Glucose(-UL) and 37 ℃ /SD/Galactose ,respectively and the proliferation ability of transformant was ob-served for 6 d .The Western blot was adopted to detect the expression of target protein .Results The pSos-SIGIRR vector was cor-rectly constructed and proved of no self-activation and toxic action .The Western blot showed that the target protein was expressed in a form of fusion protein of 170KD .Conclusion The bait plasmid containing SIGIRR cytoplasmic tail can be applied to the yeast two-hybrid system and lays the important foundation for seeking the interacting protein with SIGRR from the human lung cDNA li-brary in .

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期刊信息
  • 《免疫学杂志》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:第三军医大学
  • 主办单位:第三军医大学 中国免疫学会
  • 主编:吴玉章
  • 地址:重庆市沙坪坝高滩岩
  • 邮编:400038
  • 邮箱:richard@mail.tmmu.com.cn
  • 电话:023-68752237
  • 国际标准刊号:ISSN:1000-8861
  • 国内统一刊号:ISSN:51-1332/R
  • 邮发代号:78-32
  • 获奖情况:
  • 中国科协优秀科技期刊三等奖,全军优秀医学期刊奖,重庆市优秀期刊一等奖
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),波兰哥白尼索引,美国剑桥科学文摘,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:13273