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水稻黑条矮缩病病毒外壳蛋白基因S10的原核表达、多克隆抗体制备及应用
  • ISSN号:1001-7216
  • 期刊名称:《中国水稻科学》
  • 时间:0
  • 分类:Q939.4[生物学—微生物学] S435.119[农业科学—农业昆虫与害虫防治;农业科学—植物保护]
  • 作者机构:[1]南京师范大学生命科学学院,江苏南京210046, [2]浙江大学农业与生物技术学院生物技术研究所,浙江杭州310029, [3]江苏省农业科学院植物保护研究所,江苏南京210014
  • 相关基金:基金项目:农业部公益性行业(农业)科研专项资助项目(nyhyzx07-051);现代农业产业技术体系建设专项资金资助项目;国家自然科学基金资助项目(30670087).
中文摘要:

用RT—PCR方法从感染水稻黑条矮缩病毒(rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)水稻中克隆该病毒的外壳蛋白基因S10,然后将此外壳蛋白基因再豫克隆到原核表达载体PET-32a中构建成重组原核表达载体pET32a—CP。将重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,Ni^+NTA亲和柱纯化获得分子量约为76kD含硫氧还蛋白的融合蛋白。以纯化的重组蛋白为抗原免疫兔子制备RBSDV外壳蛋白的多克隆抗体,并用制备的多克隆抗体建立了可靠、灵敏、特异的检测RBSDV的免疫捕获RT~PCR及Dot—blot ELISA方法,为该水稻病毒病的诊断提供技术支持。

英文摘要:

The full length cDNA of rice black-streaked dwarf virus (RBSDV) segment 10 (S10) which encoded coat protein was cloned from the virus infected rice samples by RT-PCR,and subeloned into a prokaryotic expression vector pET 32a. The re combinant prokaryotic expression vector (pET-32a-CP) was used to transform Escherichia coli BL21 (DE3). A 76 kD TrxA fusion protein was obtained with induction of IPTG and purification of Ni^+ NTA affinity column. The purified recombinant protein was used to immunize rabbits for production of polyclonal antibodies against the coat protein of RBSDV. Using poly- clonal antibodies, immunoeapture RT-PCR and Dot-blot ELISA were established for reliable, sensitive and specific detection of RBSDV. The two detection methods utilized polyclonal antibodies provide technical support for the diagnosis of RBSDV disease.

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期刊信息
  • 《中国水稻科学》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:农业部
  • 主办单位:中国水稻研究所
  • 主编:程式华
  • 地址:杭州市体育场路359号中国水稻研究所内
  • 邮编:310006
  • 邮箱:cjrs@263.net
  • 电话:0571-63370278
  • 国际标准刊号:ISSN:1001-7216
  • 国内统一刊号:ISSN:33-1146/S
  • 邮发代号:32-94
  • 获奖情况:
  • 首届全国科技期刊评比二等奖,第二届全国优秀科技期刊评比三等奖,农业部浙江省优秀期刊,国家期刊奖百种重点期刊,百种中国杰出学术期刊,中国精品科技期刊,中国国际影响力优秀学术期刊
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),英国农业与生物科学研究中心文摘,美国剑桥科学文摘,美国生物科学数据库,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:17826