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微流控蛋白印迹杂交与传统Western blot对目的蛋白的检测效果比较
  • ISSN号:1001-6325
  • 期刊名称:《基础医学与临床》
  • 时间:0
  • 分类:Q33[生物学—遗传学]
  • 作者机构:[1]中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所病原学系,北京100005, [2]中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所生物化学与分子生物学系,北京100005
  • 相关基金:国家自然科学基金(81272230;81550030)
中文摘要:

目的借助微流控蛋白印迹实验实现对目的蛋白省时、省力和省试剂的定性以及相对定量分析。方法选取O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)蛋白为目的蛋白,选用高表达MGMT蛋白的MCF7细胞为细胞模型,用传统蛋白印迹杂交和纸芯片蛋白印迹杂交实验法对经过药物MGMT阻断剂(lomeguatrib)处理后MCF7细胞的MGMT蛋白表达量做定性以及相对定量分析。结果纸芯片蛋白印迹杂交可以成功进行MGMT的定性、相对定量分析,而且上样检测量可低至10~25 pg。这相比于传统Western blot的上样检测蛋白检测限1~5 ng,提高了3个数量级。整个操作流程只需要1 h,所用试剂量少,实验成本更低。而且,纸芯片的多通道构造可以实现如同反向蛋白杂交分析(RPPA)一样的,对组织蛋白表达量进行高通量的系统检测。结论微流控蛋白印迹杂交相较于传统Western blot可以检测到更微量级的蛋白,节省试剂和样品,省时和省力,并可进行高通量的定性以及相对定量分析。

英文摘要:

Objective To achieve the goal of the qualitatively and relatively quantitatively analyze of the target protein in a time-saving,labor-saving and reagents-saving way by the microfluidic paper-based immunoassay. Methods We chose MGMT as the target protein and compared the qualitative and semi-quantitative results of the MGMT expression in the MCF7 cells which was treated with MGMT inhibitor,lomeguatrib,in both the traditional Western blot and the paper chip immunoassay. Results Microfluidic paper-based immunoassay can make the qualitative and relative quantitative detection on protein expression. Compared to the sensitivity of 1-5 ng of the traditional Western blot,the microfluidic paper-based immunoassay could detect as low as 10-25 pg of the protein. The sensitivity could be improved by 3 orders of magnitude. The entire operational duration took only 1 hour with less costed reagents being consumed. It maked the high-throughput protein detection as sensitive as the reverse phase protein assays( RPPA) does. Conclusions The paper chip immunoassay could be performed qualitatively and semi-quantitatively to detect protein expression,and is more effective than that of traditional Western blot.

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期刊信息
  • 《基础医学与临床》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:北京市科学技术协会
  • 主办单位:北京生理科学会
  • 主编:章静波
  • 地址:北京东单三条五号中国医学科学院基础医学研究所内
  • 邮编:100005
  • 邮箱:basic_clinic@vip.163.com
  • 电话:010-69156964 65273665
  • 国际标准刊号:ISSN:1001-6325
  • 国内统一刊号:ISSN:11-2652/R
  • 邮发代号:82-358
  • 获奖情况:
  • 1991年北京市优秀期刊称号,2004年中国自然科学核心期刊,2004年入选《中国科技期刊科技精品数据库》,2006-2008年中国科协精品科技期刊工程资助项目(C类)
  • 国内外数据库收录:
  • 中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:15569