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新城疫病毒基因Ⅲ型强毒JS/7/05/Ch的拯救
  • ISSN号:1671-7236
  • 期刊名称:中国畜牧兽医
  • 时间:2013.10.20
  • 页码:37-41
  • 分类:S852.65[农业科学—基础兽医学;农业科学—兽医学;农业科学—畜牧兽医]
  • 作者机构:[1]扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室,江苏扬州225009
  • 相关基金:国家自然科学基金(31172338); 现代农业产业技术体系建设专项资金(nycytx-41-G07); 公益性行业(农业)专项经费(201003012)
  • 相关项目:新城疫病毒I 系苗(Mukteswar)的进化及其毒力增强的分子机制
中文摘要:

新城疫病毒Ⅰ系苗Mukteswar株为中等毒力,野外分离株JS/7/05/Ch的基因组核苷酸与其具有高于99%的相似性,但其毒力却明显强于前者。为了给基因Ⅲ型NDV的遗传进化机制研究提供基础,本研究成功构建了JS/7/05/Ch株的反向遗传平台。首先根据GenBank上公布的基因Ⅲ型新城疫病毒JS/7/05/Ch株基因组全序列设计并合成8对引物,RT-PCR扩增目的片段后,分别依次亚克隆至pCR2.1载体中构建含有JS/7/05/Ch全长基因组cDNA的克隆质粒pJS/7/05/Ch,然后再通过特异性酶切位点将JS/7/05株全长基因组cDNA转移到TVT7R(0.0)转录载体中,成功构建出含JS/7/05/Ch株基因组全长cDNA的转录质粒pTVT/JS705。然后将该质粒与3个辅助质粒pCI-NP、pCI-P和pCI-L共转染BSR-T7/5细胞,转染60h后将该细胞及其上清接种鸡胚;血凝(HA)试验和RT-PCR结果表明JS/7/05/Ch株新城疫病毒被成功拯救。

英文摘要:

The genome of JS/7/05/Ch isolate shared more than 99% nucleotide identity with that of Mukteswar strain.However,the pathogenicity of JS/7/05/Ch was much stronger than that of Mukteswar strain.In order to provide a good foundation for the further related research,we built the rescue system of JS/7/05/Ch in this study.Based on the genomic sequence of JS/7/05/Ch strain,eight pairs of primers were designed to amplify the genomic fragments by RT-PCR and cloned into pCR2.1vector,to construct the plasmid pJS/7/05/Ch which contained the full-length cDNA of NDV.Then the full-length cDNA was transferred to TVT7R(0.0)vector to construct full-length NDV infectious clone,pTVT/JS705,using specific enzymes.The infectious clone together with three helper plasmids(pCI-NP,pCI-P and pCI-L)were cotransfected into BSR-T7/ 5cell, and the transfection supernatant was inoculated into SPF embryonated eggs to rescue the virus.The results of HA and RT-PCR indicated that JS/7/05/Ch strain of NDV was successfully rescued.

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期刊信息
  • 《中国畜牧兽医》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:中华人民共和国农业部
  • 主办单位:中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
  • 主编:李琍
  • 地址:中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
  • 邮编:100193
  • 邮箱:zgxmsy@caas.cn
  • 电话:010-62816020 62811226 62810371
  • 国际标准刊号:ISSN:1671-7236
  • 国内统一刊号:ISSN:11-4843/S
  • 邮发代号:2-215
  • 获奖情况:
  • 1996年被农业部评为“95中国出版成就展”参展期刊...,1998年在首届全国畜牧兽医优秀科技期刊评比中总分...,2002年被中国期刊协会农业期刊分会和中国农学会评...
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版)
  • 被引量:22619