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嗜热四膜虫δ微管蛋白基因的克隆、鉴定及细胞定位
  • ISSN号:1007-7626
  • 期刊名称:中国生物化学与分子生物学报
  • 时间:2013.5.5
  • 页码:430-436
  • 分类:Q952[生物学—动物学]
  • 作者机构:[1]山西大学生物技术研究所,化学生物学与分子工程教育部重点实验室,太原030006
  • 相关基金:国家自然科学基金(No.30770295,No.31072000)和教育部科学技术研究重点项目(No.201026)资助
  • 相关项目:四膜虫无性与有性生殖过程中Ran GTPase的定位与功能分析
中文摘要:

微管蛋白(tubulin)在细胞的结构和功能中发挥着重要作用,d微管蛋白和B微管蛋白是组成微管的主要因子,y微管蛋白促使0【和B微管蛋白二聚体组装为微管结构.然而,4种新的微管蛋白和η-tubulin在细胞中的功能并不完全清楚.本研究从嗜热四膜虫大核基因组数据库中鉴定了一种新的编码8微管蛋白基因(Tetrahymenadeltatubulin1,TDTl,TTHERM一00335970,http://www.ciliate.org),TDTl基因转录产生1326bp和1363bp两种不同的转录本,1326bp的转录本编码441个氨基酸的多肽;而1363bp的转录本含有37bp未剪切的内含子序列,从而导致开发读框发生移码突变现象.实时荧光定量PCR结果表明,TDTl基因在四膜虫细胞营养生长和有性生殖过程中都有表达,且在有性生殖过程中的表达显著上调.免疫荧光定位表明,TDTl蛋白不仅定位于四膜虫基体和有性生殖期COnjugationjunction结构,而且在四膜虫的大核和小核中也有定位.TDTl基因敲除发现,该基因不能通过表型分配完全被巴龙霉素抗性基因替代,结果表明,TDTl蛋白在四膜虫细胞中可能具有多种不同的功能,它的正常表达对四膜虫细胞的生存是必需的.

英文摘要:

Tubulin is a highly conserved heterodimeric protein comprised of monomeric globular polypeptides of or- and 13-tubulins. Besides ~/-tubulin, which is required to initiate the assembly of a-15 tubulin heterodimers to form microtubule polymers, 4 new members of tubulin superfamily and Xl-tubulin) were indentified. In this study, the 8-tubulin gene from Tetrahymena thermophia (Tetrahymena delta tubulin 1, TDT1, TTHERM_00335970, http://www, ciliate, org) was isolated. Two different transcripts, 1 326 bp and 1 363 bp, were obtained by RT-PCR. The 1 326 bp transcript encodes 441 amino acids; the 1363 bp transcript is a frame-shift mutant containing a 37 bp intron. Quantitative reverse transcriptase PCR (qRT-PCR) analysis showed that TDT1 was expressed in both the growing and conjugation stage with higher levels in the latter. HA-tagged TDT1 localizeds at the basal bodies, macronuclei, micronuelei and conjugation junction. The TDT1 knockout strains showed that neo4 cassette could not fully replace the macronuclear TDTI with increasing paromomysin concentration. The results indicated that TDT1 was a multifunctional protein for normal functions of Tetrahymena cells.

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期刊信息
  • 《中国生物化学与分子生物学报》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:中国科学技术协会
  • 主办单位:中国生物化学与分子生物学会 北京大学
  • 主编:周春燕
  • 地址:北京市学院路38号北京大学医学部
  • 邮编:100083
  • 邮箱:shxb@bjmu.edu.cn
  • 电话:010-82801416
  • 国际标准刊号:ISSN:1007-7626
  • 国内统一刊号:ISSN:11-3870/Q
  • 邮发代号:82-312
  • 获奖情况:
  • 被美国《CA》列入世界引用频次最高的《千种表》
  • 国内外数据库收录:
  • 俄罗斯文摘杂志,美国化学文摘(网络版),美国生物科学数据库,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版)
  • 被引量:9731