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截短型细胞毒素Gelonin的分子构象和生物活性
  • ISSN号:1007-7626
  • 期刊名称:《中国生物化学与分子生物学报》
  • 时间:0
  • 分类:Q78[生物学—分子生物学] Q71[生物学—分子生物学]
  • 作者机构:[1]教育部化学生物学与分子工程重点实验室、生物技术研究所、山西大学,太原030006, [2]中国科学院上海药物研究所,上海201203, [3]山西省肿瘤研究所,太原030013
  • 相关基金:国家自然科学基金资助项目(No.30270292)
中文摘要:

为了探索免疫络合物中具杀伤靶细胞的毒素,gelonin的结构与功能的关系,根据化学合成的gelonin基因序列和3维分子构象设计了N端区Gly,Leu,Asp和/或C端区Asp,Lys,Asp,Pro,Lys缺失的gelonin.以重组质粒pE-gel为模板,在相应引物存在下,用PCR法获得5'端区和/或3'端区碱基序列缺失的gelonin基因片段.经克隆、表达和纯化得到3种截短型gelonin(G-N3、G-C5、G-N3C5).CD谱和荧光谱表明,完整型gelonin(G-O)与截短型gelonin的分子构象有明显的差异.它们的构象变化与类DNase活性和抑制肿瘤细胞生长的能力均为G-O≥G-N3>G-C5>G-N3C5.结果再一次证明了具有α+β型结构蛋白,gelonin的构象与生物活性的一致性.

英文摘要:

To explore the relationship between the structure and function of cell toxin gelonin as the bullet of immunoconjugate to specially kill and wound target cells, truncated gelonins deleted at N-terminal region Gly, Leu, Asp and/or C-terminal Asp, Lys, Asp, Pro, Lys were designed on the basis of its gene sequence and three dimentional molecular conformation. DNA fragments of recombinant gelonin and its truncated products were amplified by PCR with plasmid pE-gel as the template in the presence of different primers, and in turn, the relevant proteins, e.g. intact gelonin (G-O) and truncated gelonins (G-N3, G-C5, G-N3C5) were obtained by processes of cloning, expression and purification. CD and fluorescence spectra evaluating the conformational change of protein show that truncated gelonins are obviously different from the intact molecule, showing that the α-helix relative content in truncated form decreased. Furthermore, DNase-like activity in vitro and the ability of inhibiting tumour cell growth in vivo are as following G-O≥G-N3〉G-C5〉G-N3C5. In conclusion, results in this study demonstrate the consistency of the structure and bioactivity of gelonin with the protein of α + β conformation.

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期刊信息
  • 《中国生物化学与分子生物学报》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:中国科学技术协会
  • 主办单位:中国生物化学与分子生物学会 北京大学
  • 主编:周春燕
  • 地址:北京市学院路38号北京大学医学部
  • 邮编:100083
  • 邮箱:shxb@bjmu.edu.cn
  • 电话:010-82801416
  • 国际标准刊号:ISSN:1007-7626
  • 国内统一刊号:ISSN:11-3870/Q
  • 邮发代号:82-312
  • 获奖情况:
  • 被美国《CA》列入世界引用频次最高的《千种表》
  • 国内外数据库收录:
  • 俄罗斯文摘杂志,美国化学文摘(网络版),美国生物科学数据库,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版)
  • 被引量:9731