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利用正交设计优化茶树ISSR反应体系
  • ISSN号:1003-8981
  • 期刊名称:《经济林研究》
  • 时间:0
  • 分类:S571.1[农业科学—茶叶生产加工;农业科学—作物学]
  • 作者机构:[1]南京农业大学茶叶科学研究所,江苏南京210095, [2]恩施州农业科学院茶叶研究所,湖北恩施445000
  • 相关基金:江苏省科技攻关计划(BE2009 BE2008320-2); 苏州市农业科技攻关计划(SNG0904 SNG0926 SNG0809 WNZ0802); 国家自然科学基金(30800884); 现代农业产业技术体系建设专项资金资助
中文摘要:

为优化茶树ISSR分子标记反应体系,对影响茶树ISSR反应较大的Mg2+浓度、dNTP浓度、模板DNA浓度、TaqDNA聚合酶浓度、引物浓度5个因素在4水平上进行优化试验,建立了适合于茶树ISSR-PCR(Inter Simple Sequence Repeats-Polymerase Chain Reaction)的最佳体系:20μL反应体系中,TaqDNA聚合酶0.75U/μL,10×buffer(含Mg2+)2.0mmol·L-1,模板DNA20ng,dNTP0.1mmol·L-1,引物0.3μmol·L-1。反应程序为:94℃预变性5min,94℃变性1min,50~60℃退火40s,72℃延伸90s,34次循环,72℃延伸7min,4℃保存。

英文摘要:

In order to optimizing ISSR reaction system in tea, the concentrations of Mg2+, dNTP, DNA template, Taq DNA polymerase and primer DNA were optimized at four levels by orthogonal design, effects of the five factors on ISSR amplification in tea plants were rather significant.The optimized ISSR-PCR system for tea plants was established as follows: 0.75 U/μL Taq DNA polymerase, 2.0 mmol·L-1 Mg2+, 20 ng DNA template, 0.1 mmol·L-1 dNTP and 0.3 μmol·L-1 primer were contained in 20 μL reaction system, and the reaction procedure was shown as below: 94 ℃ for 5 min, followed by 34 cycles of 94 ℃ for 1 min, annealing for 40 s at 50-60 ℃, and extending for 90 s at 72 ℃, and was terminated for 7 min at 72 ℃, then stored at 4 ℃.

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期刊信息
  • 《经济林研究》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:湖南省教育厅
  • 主办单位:中南林业科技大学
  • 主编:谭晓风
  • 地址:湖南省长沙市韶山南路498号中南林业科技大学期刊社
  • 邮编:410004
  • 邮箱:jjlyj-csfu@163.com
  • 电话:0731-5658526
  • 国际标准刊号:ISSN:1003-8981
  • 国内统一刊号:ISSN:43-1117/S
  • 邮发代号:
  • 获奖情况:
  • 国内外数据库收录:
  • 中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版)
  • 被引量:11076