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猪圆环病毒2型ORF3基因的克隆及原核表达
  • ISSN号:1006-060X
  • 期刊名称:湖南农业科学
  • 时间:2012.2.15
  • 页码:120-122
  • 分类:S852.659.2[农业科学—基础兽医学;农业科学—兽医学;农业科学—畜牧兽医]
  • 作者机构:[1]兰州交通大学化学与生物工程学院,甘肃兰州730070, [2]中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原学国家重点实验室,甘肃兰州730046
  • 相关基金:国家自然科学基金青年基金项目(31101803)
  • 相关项目:猪圆环病毒2型与猪肺泡巨噬细胞相互作用的分子机制
中文摘要:

以细胞总基因组提取试剂盒抽提PCV2细胞毒株总DNA为模板,用特异性引物扩增PCV2ORF3基因。将ORF3和表达载体pGEX-6p-1用BamltI和SalI双酶切回收后连接,将测序验证为阳性的重组质粒命名为pGEX-6p-1-ORF3。重组质粒pGEX-6p-1-ORF3转化BL21(DE3)后用IPTG诱导表达并纯化,对获得的表达产物进行SDS-PAGE电泳、Westernblot检测。结果表明:PCV2ORF3在pGEX-6p-1中获得了高效表达,其表达蛋白主要以包涵体形式存在,其分子质量约为37kD,且能够和PCV2阳性血清发生特异性相互作用,具有免疫学活性。

英文摘要:

Total DNA of porcine circovirus type 2 (PCV2) was extracted by the total cellular genome extraction kit, and a special primer was designed to amplify PCV20RF3 gene. Then, ORF3 and expression vector pGEX-6p-1 were digested by BarnH I and Sal I, and then were ligated together. The recombinant plasmid which sequencing test was positive was named as pGEX-6p-I-ORF3, and it was transformed into BL21 (DE3), then the fusion proteins were expressed when it was induced by 1 mmol/ L of IPTG and purified. The obtained expression products were tested by SDS-PAGE and Western blot. The results showed that the PCV20RF3 was expressed in pGEX-6p-1, which mainly existed with the form of inclusion body; the ORF3 protein was 37 kD in molecular mass and it can generate specificity interaction with the positive serum of PCV2. Therefore, the ORF3 protein have a good immunology activity.

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期刊信息
  • 《湖南农业科学》
  • 主管单位:湖南省农业科学院
  • 主办单位:湖南省农业科学院
  • 主编:邹学校
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  • 国际标准刊号:ISSN:1006-060X
  • 国内统一刊号:ISSN:43-1099/S
  • 邮发代号:42-20
  • 获奖情况:
  • 1987年获湖南省科技情报成果二等奖,1988年被评为全国优秀科技期刊,1992年获湖南省优秀科技期刊三等奖,2003、2005年连续被评为湖南省一级期刊,2004年荣获全国优秀农业期刊一等奖,2008年杂志社被评为“2008年度全省农村出版物发行...
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