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马氏珠母贝ISSR-PCR反应条件优化
  • 期刊名称:安徽农业科学,2006,34:5806-5807
  • 时间:0
  • 分类:Q78[生物学—分子生物学]
  • 作者机构:[1]盐城工学院,江苏盐城224003, [2]广东海洋大学,广东湛江524025, [3]海南大学海洋学院,海南海口570228, [4]海南省热带水生生物技术重点实验室,海南海口570228
  • 相关基金:国家自然科学基金资助项目(39969003,30360084);国家863计划项目(2(XY2AA603022).
  • 相关项目:马氏珠母贝遗传图谱的构建及若干经济性状的QTL定位
中文摘要:

采用ISSR技术对马氏珠母贝进行PCR扩增,100个引物筛选出48个呈阳性反应的引物。对影响ISSR-RPCR反应的Mg^2+浓度、模板浓度、Taq酶浓度、引物退火温度和反应循环数进行了优化,并对甲酰胺对试验的影响进行了初步探讨。结果表明:优化的马氏珠母贝ISSR反应条件为①反应体系2.5μl 10×buffer,镁离子浓度1.5mmol/L,Taq酶1.0U,200nmmol/L ISSR引物,模板浓度为50ng/μl,2%甲酰胺,0.10mmol/L dNTP,加双蒸水至总体积25μl;②反应程序预变性94℃,5min;变性94℃,30s;退火52℃,1min;延伸72℃,2min;39个循环;延伸72℃,7min。

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