中文摘要：

严重创伤后继发性器官损害可致MODS的发生，而过度活化的巨噬细胞(Mф)释放炎症介质及对凋亡/坏死细胞清除能力的降低贯穿了该病理过程。我们前期观察到吴茱萸碱(EVO)可明显逆转该变化，结合活化Mф高表达叶酸受体(FR)的特点，成功合成叶酸-EVO (FE)并发现其对创伤+内毒素攻击小鼠死亡率的降低作用优于EVO。本项目拟首先明确FE对活化Mф调节作用有赖于FR介导的内化效应；从Mф的AhR核移位、凋亡、自噬活性及相关分子变化探讨其作用机制；通过小鼠足趾炎症、腹膜炎模型证实FE在炎症病灶部位的靶向分布及其对活化Mф功能的特异调节；再通过创伤+内毒素攻击小鼠模型，验证FE对器官功能损害程度、持续时间的干预效果；探索性研究FE对病灶部位Mф由促炎向促修复表型转变的影响。研究结果将有助于揭示FR靶向的EVO对严重创伤后继发性器官损害的保护作用机制，并为降低MODS发生的新型免疫调节剂研发奠定基础。

结论摘要：

严重创伤后继发性器官损害可致 MODS 的发生, 而过度活化的巨噬细胞释放炎症介质及对凋亡／坏死细胞清除能力的降低在该病理过程中发挥重要的角色。我们前期观察吴茱萸碱（EVO)可明显逆转该变化。基于活化的巨噬细胞高表达叶酸受体的特点，我们设计并合成了叶酸-EVO，靶向定位于巨噬细胞而发挥作用。本项目的研究内容主要包括1）证实叶酸-EVO对炎性巨噬细胞的功能调节并研究所涉及的分子机制；2）在酵母多糖或是脂多糖诱导的腹膜炎模型中评价叶酸-EVO对机体炎症反应的抑制作用以及对脏器功能的保护作用。本项目首先证实新合成的叶酸-EVO溶解度是EVO的40倍，并且仅抑制叶酸受体高表达的Hela细胞的增殖，而对静息状态的RAW264.7细胞（叶酸受体低表达）无影响，表明叶酸-EVO发挥作用需要叶酸受体的介导，这正符合当初我们的设计理念。之后我们检测叶酸-EVO对炎性巨噬细胞炎症因子分泌的影响，发现其对IL-6、TNF-α、IL-10蛋白表达起到明显的抑制作用，通过机制研究发现EVO一方面可通过抑制下调IκBα磷酸化水平，阻止IκBα蛋白的降解，进而阻抑NF-κB p65入核来发挥抗炎效应；另一方面显著降低细胞总AhR的蛋白含量以及AhR与Stat1的结合，进而抑制核蛋白与NCE以及非共有序列DRE的结合活性。在动物实验中，结果显示叶酸-EVO可下调酵母多糖所诱导的腹膜炎中血清炎症因子的高峰值，同时对肾脏和心脏的功能损害具有缓解效应。然而在脂多糖诱导的急性腹膜炎中，叶酸-EVO的保护效应并不明显，其中所涉及的原因可能是由于叶酸-EVO拥有比EVO大3倍的分子量，从而导致药物无法被机体及时吸收。因此下一步本课题组还需要对叶酸-EVO的结构实施进一步的优化。本项目顺利完成预期的目标，叶酸-EVO的成功合成以及药效和分子机制的研究，不仅有助于揭示以叶酸受体为靶向的EVO对多器官功能损害的保护作用机制，并为降低MODS发生的新型免疫调节剂研发奠定基础。本项目已发表 SCI论文1篇，会议论文摘要2篇，申报国家发明专利2项。