中文摘要：

p27kip1蛋白是一种调控细胞周期并抑制细胞分裂的重要因子。正常细胞中p27kip1高水平表达于细胞核并使细胞周期G1期阻滞，而在肿瘤细胞p27kip1蛋白被快速转运至细胞浆并降解，从而使细胞进入S期并加速了细胞分裂，导致这种差异的分子机制并不清楚。本项目拟用分子交联剂（crosslinker）和免疫共沉淀技术，结合二维电泳的方法筛选出导致肿瘤细胞p27kip1蛋白错位分布和低表达的关键信号分子。该研究不仅有助于阐明p27kip1分子的生物学特性和细胞周期调控的分子机制，而且为进一步设计开发针对细胞增殖周期调控的药物和干预靶点，进而阻止和逆转肿瘤细胞增殖失控提供新的思路。

结论摘要：

p27kip1（以下简称p27）是细胞周期调控机制中关键的抑制因子，具有抑制肿瘤细胞过度增殖和促进细胞凋亡等重要作用，被认为是未来肿瘤治疗的潜在靶点。作为抑癌基因，p27分子在肿瘤细胞内功能失常，表现为低丰度表达和细胞核外的错位分布，导致这种改变的分子机制并不清楚。p27分子有多个潜在的磷酸化位点，其中S10和T187是最主要的磷酸化位点。本研究构建p27 联合突变体p27S10A/T187A,转染HepG2 细胞，结果发现该联合突变体并不改变其对细胞周期G0期阻滞和细胞生长抑制作用。进一步研究发现联合突变体细胞核外转运明显阻断，推断该突变体在细胞内的滞留是其发挥细胞周期阻滞和生长抑制的主要机制。进一步运用基因芯片技术比较空质粒、野生型和S10A突变型p27转染乳腺癌细胞株MCF-7比较基因表达谱变化。发现多基因共同参与了p27kip1抑制肿瘤细胞过度增殖以及促进细胞凋亡的作用。对于p27kip1相关基因群的研该研究不仅有助于阐明p27kip1分子的生物学特性和细胞周期调控的分子机制，而且为进一步设计开发针对细胞增殖周期调控的药物和干预靶点，进而阻止和逆转肿瘤细胞增殖失控提供新的思路