细胞周期抑制、细胞凋亡诱导及坏死性细胞毒等活性均表现出对癌细胞增殖的抑制作用。据此,本研究作为一级初筛首先采用了MTT和SAR法,用小鼠乳腺癌tsFT210细胞和各种人癌细胞进行了大量样品的广泛筛选;作为二级筛选,选择初筛有一定活性的样品,采用流式细胞术并结合显微镜下观察细胞形态的方法,同时检测了样品的细胞周期抑制和细胞凋亡诱导活性;作为三级筛选,选择二级筛选中初步判断有细胞凋亡诱导活性的样品,用颗粒力度分析法和DNA梯状带检测法筛选并确证了样品的细胞凋亡诱导活性。该活性筛选体系采用staurosporine和紫杉醇(G2和M期抑制剂)、cycloheximide(G0/G1期抑制剂)、顺铂(细胞凋亡诱导剂)等阳性对照药物不断修改和完善实验方法,实现了实验操作的程序化和规范化,体系中各种模型的三级组合筛选层次合理、实验操作简便易行、结果直观可靠,适于较大批量微量样品的活性初筛以及活性成分的快速跟踪分离。利用该体系筛选了数千种中草药和近万株微生物样品的相关活性,并通过活性跟踪分离从活性样品中分离得到了包括新骨架结构新化合物在内的200多个活性化合物。
英文主题词Cell cycle inhibition; apoptosis induction; anticancer activity; screening; bioactive compound