近年我国黑热病发病率逐年上升,缺乏满意的药物治疗和疫苗预防。本项目以生物信息学技术、siRNA技术(小干扰RNA技术)和体内体外攻击感染,从杜氏利什曼原虫四川人株无鞭毛体种株特异表达和无鞭毛体期特异表达基因片段中筛选我国流行虫株的毒力基因,从分子水平揭示我国利什曼原虫致病机制。为研制有效的抗我国利什曼病药物和遗传减毒活疫苗提供分子靶位,为其它不产毒素病原体的致病机理研究提供相关理论和技术基础。
为了揭示杜氏利什曼原虫四川人株的病原学特征和相关毒力基因,我们系统比较了杜氏利什曼原虫四川人株和其它国际标准株前鞭毛体在不同体外培养条件下的生长动力学曲线,不同体外诱导条件下向无鞭毛体转化的效率,前鞭毛体和诱导生成的无鞭毛体对Balb/c小鼠和金黄地鼠的致病性。证实杜氏利什曼原虫四川人株具有典型内脏利什曼原虫病原生物学特征。以RT-PCR方法观察了10个文献报道的利什曼原虫毒力基因在杜氏利什曼原虫四川人株和其它不同种株利什曼原虫前鞭毛体和无鞭毛体内的表达状况,发现A2、A2rel,GDPMP为其主要毒力基因,以SSH技术对杜氏利什曼原虫四川人株前鞭毛体/无鞭毛体mRNA进行消减抑制杂交,并以RACE技术对意义表达序列标签全长基因克隆,克隆到一新的可能与原虫入侵巨噬细胞有关的命名为ESAG样蛋白的膜受体编码基因,该基因已被Genbank接纳,登记号为EF151425。