中文摘要：

本项目首先对前期工作中苹果籽糖苷酶的纯化蛋白进行测序，获得部分肽段序列，根据测序信息克隆表达了新苹果籽糖苷酶基因；同时我们还利用基因数信息克隆表达了来源于杨树，樱桃等植物来源的糖苷酶基因，但在大杆菌中表达均没有表现出酶活。考虑到可能植物来源的糖苷酶基因在原核中高活性异源表达有一定难度，随即我们稍微转变策略，以苹果籽糖苷酶基因序列为探针进行数据挖掘，寻找与之有一定同源性的原核来源糖苷酶基因序列，从稳定角度出发我们选择了与苹果籽糖苷酶的同源性达40%的来源于极端嗜热古细菌Dictyoglomus thermophilumβ-葡萄糖苷酶(DtGH),，研究发现该酶表现出很高的热稳定性和较高的活力，且具有较好的糖耐受性，具有植物糖苷酶的某些特点。将其用于长链烷基糖苷辛基糖苷的合成，其合成效率高于苹果籽糖苷酶，且在70摄氏度下合成糖苷，其反应时间从7天缩短为3天，辛基糖苷的合成总浓度提高了27%，DtGH甚至可以在100摄氏度下合成糖苷，其热稳定性远远高于苹果籽糖苷酶，具有广阔的工业应用前景。同时优化固定化的粗杏仁粉催化合成长链烷基糖苷，在癸基糖苷合成中取得了良好的效果。