中文摘要：

内分泌治疗是激素依赖性乳腺癌的主要疗法，耐药是影响其远期疗效的主要原因。目前的资料强烈支持HER2/ERα/EGFR/SRC的交互作用及其下游MAPK、PI3K/AKT的激活是耐药产生的主要机制。据此很多靶向药进入临床前研究，但在实际中并未取得预想的效果，故挖掘有这方面作用的中药很有意义。疏肝益肾方前期临床实践表明其对激素依赖性乳腺癌有增效减副作用，可使最易对内分泌耐药的LuminalB型乳腺癌患者无进展生存期延长，体外实验显示其对三苯氧胺耐药的细胞株有明显的抑制作用，故推测其增效与抗耐药有关。本项课题以耐药的裸鼠移植瘤为研究对象，药物干预后定位、定量、定性检测HER2/ERα/EGFR/SRC的交互作用及其下游基因MAPK、PI3K的变化，并辅以高通量的基因芯片验证、补充，全方位探讨疏肝益肾方抗内分泌耐药的增效机制。如能发掘出逆转或延迟内分泌耐药的有效方剂，具有重要现实意义。

结论摘要：

内分泌治疗是激素依赖性乳腺癌的主要疗法，耐药是影响其远期疗效的主要原因。目前的资料强烈支持HER2/ERα/EGFR/SRC的交互作用及其下游MAPK，PI3K/AKT的激活是耐药产生的主要机制。据此很多靶向药进入临床前研究，但在实际中并未取得预想的效果。疏肝益肾方前期临床实践表明其对激素依赖性乳腺癌有增效减副作用，体外实验显示其对三苯氧胺耐药的细胞株有明显的抑制作用，故推测其增效与抗耐药有关。本项课题以耐药的裸鼠移植瘤为研究对象，药物干预后定位、定量、定性检测HER2/ERα/EGFR/SRC的交互作用及其下游基因MAPK,PI3K的变化，并辅以高通量的基因芯片验证、补充、完善疏肝益肾方抗内分泌耐药的增效机制。结果发现，1.疏肝益肾方具有抑制MCF-7WT、MCF-7LCC9的增殖能力以及迁移能力的作用，并且疏肝益肾方+他莫昔芬联合组抑制作用最强,表明疏肝益肾方可以增强他莫昔芬的细胞毒作用,且对耐药性产生延迟以及逆转作用。2.疏肝益肾方能够降低LCC9细胞 HER2、P38 MAPK、P- P38 MAPK、P-P44 MAPK、P-EGFR、P-PI3K蛋白的表达量，同时能够提高ERα的表达。3.通过基因芯片技术，lcc9细胞中药组和空白组比较，上调差异基因参与的显著性信号转导通路涉及RNA的降解、嘧啶的代谢、RNA聚合酶等通路；其下调差异基因参与的显著性信号转导通路涉及MAPK通路、VEGF通路、钙信号通路等。 4.疏肝益肾方能够抑制MCF-7CA 以及LTLT-CA的增值的能力。而且对来曲唑耐药性产生延迟以及逆转作用。5.疏肝益肾方能够降低P-PI3K蛋白的水平，P-EGFR蛋白的水平，P-MAPK蛋白的水平、P-SAPK蛋白的的水平,但对其mRNA的表达并无显著影响。6. 基因芯片技术分析结果LTLT-CA来曲唑耐药可能与PI3K-Akt信号通路的上调相关，而疏肝益肾方逆转耐药的机制可能与下调PI3K-Akt信号通路有关。由此可见， 疏肝益肾方逆转MCF-7 LCC9三苯氧胺耐药的机制可能与下调HER-2基因的表迗，抑制MAPK通路、VEGF通路等通路,下调AKT3的表达,提高细胞ERa的表达相关。疏肝益肾方逆转来曲唑耐药可能与下调PI3K-Akt信号通路以及抑制PI3K、EGFR、MAPK、SAPK、EGFR、MAPK 蛋白的磷酸化相关。