中文摘要：

申请者前期工作中首次报导了S100A7特异性高表达于肺鳞癌和大细胞肺癌中，其高表达与肺鳞癌的脑转移密切相关；并发现肺癌病人血清中S100A7蛋白水平明显高于正常对照组。进一步研究发现S100A7过表达后可明显促进肺鳞癌细胞的体内外生长，初步结果表明这种作用很可能是通过其胞外作用实现的。迄今为止，文献报道S100A7胞外作用的唯一受体是RAGE。因此，本申请课题的关注点集中在S100A7促进肺癌细胞生长的胞外作用及其与RAGE的相关性。我们拟从以下几个方面进行研究一、S100A7通过胞外作用对不同肺癌亚型细胞的体内外生长影响；二、S100A7对RAGE表达调控的影响；三、 RAGE过表达对S100A7生物学功能的影响；四、影响膜结合的RAGE表达和sRAGE产生的相关因素研究；五、初探S100A7和RAGE结合后激活的信号通路。上述结果将为肺癌的治疗和新药开发提供新的视角

结论摘要：

S100A7又称作psoriasin， 1991年首次发现其高表达于牛皮癣患者的角质形成细胞中，在其他正常组织和细胞中低表达或不表达。但在多种鳞癌中高表达。我们的前期工作已报道，S100A7高表达与肺鳞癌脑转移密切相关，且选择性高表达于肺鳞癌和大细胞肺癌组织和血清中。S100家族部分成员除了在胞内发挥作用外，还可分泌到胞外发挥作用。迄今为止，发现S100A7通过与RAGE结合对白细胞有趋化作用。但胞外的S100A7对癌细胞是否有作用未见任何报道。为了探究S100A7促进肺癌细胞体内外生长是否与RAGE有关。我们构建了pET30a+/S100A7重组表达质粒，经过诱导表达、亲和纯化和去除内毒素以及质谱鉴定，我们得到了S100A7原核表达蛋白。体外实验结果显示，外加的不同浓度的S100A7蛋白对肺癌细胞生长和迁移均无显著影响。进一步检测发现肺癌细胞中RAGE呈现低表达。因此，我们推测上述结果可能有两个原因一个是原核表达的S100A7蛋白不能形成同源二聚体（其发挥生理功能形式），另一个可能是RAGE表达较低所致。为此，我们在稳定过表达S100A7的肺癌细胞及其空载细胞中瞬时导入RAGE质粒。结果显示过表达RAGE可明显抑制两组细胞的中增殖，并对空载组细胞的作用尤为显著。上述结果表明RAGE过表达抑制肺癌细胞生长，而S100A7过表达可部分逆转了RAGE的抑制作用。另外我们发现过表达S100A7的培养上清可明显促进肺鳞癌和大细胞肺癌的生长，但加入S100A7抗体可明显抑制上述细胞的生长。有此可见，肺癌细胞生长确实与S100A7表达呈正相关；与RAGE表达呈负相关，且二者是通过不同的信号通路发挥各自的生物学作用。此外，我们发现S100A7过表达或沉默对RAGE的表达无影响，反之也是。在实验中我们发现了一个有趣的现象，S100A7在多种鳞癌组织和细胞系中呈现异质性表达，更重要的发现是当鳞癌细胞生长微环境改变时，如 confluence和悬浮培养，S100A7阴性细胞可转变为阳性细胞；当恢复正常培养后，S100A7阳性细胞数量也随之锐减。鳞癌细胞体内接种也可诱导S100A7表达。上述结果说明S100A7表达是动态的，且与其生长的微环境密切相关。随后发现并证明了S100A7通过GATA-3/caspase-14和NF-？B/p63两条通路调控鳞癌细胞的生长和抑制。