中文摘要：

本研究拟通过基因重组技术，在已获得人源轮状病毒VP7转基因马铃薯的基础上，将人源轮状病毒的另外两个抗原基因VP4、VP7和霍乱毒素B亚单位（CTB）融合构建入植物表达载体，通过转基因植物技术，以农杆菌LBA4404介导方式转入马铃薯基因组中。根据马铃薯可有性杂交和转基因植物单拷贝基因遵从孟德尔遗传规律的特点，进行转基因马铃薯有性杂交，获得同时含有VP7、VP4、VP6和CTB基因的转基因马铃薯。借助多价抗原的免疫效应和CTB的佐剂作用，提高抗原的免疫原性，诱导保护性粘膜免疫和体液免疫。并应用实验动物模型检测转基因植物疫苗的免疫学功能和抗HRV感染功能。本研究有望提供一种安全、价廉且易于推广的HRV候选疫苗形式。

结论摘要：

利用外源基因转化可在植物基因组稳定传代的特点，本研究在获得人源轮状病毒抗原基因VP7转基因植物的基础上，通过实验室培养箱和室外阳光温室多次传代研究，首次证明转基因植物疫苗可进行多达50代次以上的稳定传代培养。采用RT-PCR、ELISA、Western blotting等分子生物学检测，证明经过多次传代的转基因植物疫苗能够稳定表达外源基因，在明确其抗原性稳定的基础上，进行动物实验，明确其免疫原性。诱导的体液免疫和粘膜免疫应答与初次传代的疫苗所诱导的应答无显著性差异，所诱导的细胞因子IL-2，IFN-γ,TGF-β均上调，提示T细胞的活化趋于Th1和Th3极化，同时TGF-β的上调较好的解释了转基因植物疫苗诱导粘膜IgA高滴度产生的原因，相关发生机制有待进一步研究。我们的研究证明转基因植物疫苗传代50代次仍稳定，为进一步疫苗的研制和临床试验提供了实验依据和理论基础。通过大量分离临床RV毒株，得到04－06年重庆市主要婴幼儿腹泻RV流行株，采用小型猪初步建立了人源RV动物腹泻模型，观察其感染及病理改变特点，比较不同品系小型猪感染情况，为RV转基因植物疫苗的药效实验奠定了基础。