本研究以项目组前期克隆的候选基因GhGST、GbSTK和GbVe为研究对象,采用半定量RT-PCR或实时定量RT-PCR技术,研究并明确了候选基因GhGST、GbSTK和GbVe的时空表达特性。GhGST在棉苗根中的表达量明显高于茎和叶。在黄萎病菌胁迫条件下,GhGST在根中的表达量较未接种对照明显增加。GbSTK在接种前表达量很低,但接种后4h表达量开始增强,24h时基因表达量明显增强,且一直持续到48h。Ve基因在棉苗根中的表达量明显高于茎和叶,且在抗、感棉花品种呈现不同的表达模式,说明这些基因参与了棉花黄萎病抗病反应。成功构建了候选基因的原核表达载体,并成功实现了目标蛋白的原核表达。构建了候选基因的融合表达载体,通过基因枪轰击洋葱表皮细胞,将GbSTK定位于细胞骨架,GbVe定位于细胞膜。同时还构建了候选基因的真核过表达载体,农杆菌介导转化烟草或拟南芥,获得了转基因烟草或拟南芥纯合株系,并分析了基因的生物学功能,转基因烟草或拟南芥的黄萎病抗性明显得到提高。
英文主题词cotton; resistant genes related to Verticillium wilt; funtional identification; expression characteristic