中文摘要：

针对狼疮性肾炎(LN)药物治疗靶点单一的现状，提出启动信号转导负调控机制干预LN的假说。课题以JAK/STAT信号通路SOCS3及TLR/NF-κB信号通路SIGIRR为切入点，体外应用基因重组技术构建SOCS3表达的BXSB小鼠肾小管上皮细胞，体内应用构建重组脂质体注射BXSB鼠肾皮质，阐明SOCS3不同时程mRNA和蛋白表达与LN其它免疫及病理指标变化相关性；采用SP免疫组化二步法检测肾小管上皮细胞TLR4和NF-κBP65表达，采用脂质体转染技术构建SIGIRR高表达细胞株，观察外源性SIGIRR基因阻断LPS对TLR信号通路激活、下调MyD88等表达关系，以期阐明LN免疫发病与相关信号通路负性调控因子间关系的分子机制；拟建立以诱导相关信号通路负调控基因表达、早期干预以重建免疫调控网络的治疗LN新药发现平台。该项目为LN药物治疗提供新思路和发现新靶点，具有一定的科学和理论意义。

结论摘要：

针对SLE发病机制不明及有效药物不足现状，本课题以BXSB鼠、MRL/lpr鼠和NTS肾炎模型鼠为研究对象，探讨狼疮性肾炎（LN）发展与JAK/STAT 信号通路、TLR4/NF-κB通路网络调节紊乱及与负调控分子SOCS3、SIGIRR表达相关性，从多层水平探究SOCS3、SIGIRR调节与LN病变的关系。本课题重点对双氢青蒿素在以上信号通路中的作用环节及分子机制进行研究，以期发现新药物靶点。课题明确了狼疮小鼠肾组织中SOCS3/SIGIRR负性调控分子表达及与肾炎发展的关系。动态观察表明BXSB小鼠其肾组织SOCS3表达随炎症程度增加而升高。NTS肾炎模型中，其肾炎损伤严重期d20 SOCS3表达升高，恢复期表达增加，抑制JAK2，STAT3磷酸化，有自身免疫损伤负调控反应，提示SOCS3在肾炎恢复期发挥作用。MRL/lpr鼠实验发现与同龄C57BL/6鼠相比，其尿蛋白水平随周龄增加升高，HE、Masson染色示该鼠有肾小球纤维化和硬化趋势；WB和IHC结果示，MRL/lpr小鼠肾组织SIGIRR蛋白表达增加。研究双氢青蒿素（DHA）对LN作用及与SOCS3/SIGIRR两种负性调控分子相关性，结果示DHA对NTS肾炎有良好治疗作用，可降低蛋白尿水平，减轻肾组织病理损伤，其作用与升高肾脏组织SOCS3表达相关。DHA高剂量组相比模型组，其SIGIRR蛋白表达有升高趋势，而低剂量组其IRAK1蛋白表达明显升高，提示DHA可升高负性调控蛋白SIGIRR，减少TLR4/NF-κB通路下游IRAK1蛋白表达发挥抑制LN作用。HK2细胞的体外实验，DHA对可诱导SOCS3表达的IL-6/TNF-？分泌有升高作用，诱导损伤的HK2细胞表达SOCS3。以LPS刺激HK-2细胞产生炎性损伤体外模型，DHA对LPS刺激引起的IL-6和趋化因子CCL2分泌有干预。WB结果示，DHA随作用时间延长时SIGIRR表达升高。本项目的科学意义发现SOCS3/SIGIRR在狼疮鼠肾组织中表达与肾炎发展的关系，为SLE病理生理机制研究提供一定科学依据。对DHA机制研究获得突破，阐明DHA治疗狼疮肾炎作用与两种负性调控分子的相关性，为发现具有诱导SOCS基因表达的靶向药物，建立启动JAK/STAT途径负性调节机制的新药发现、筛选更多有效的SLE治疗药物提供实验依据。