本项目将小麦矮缩病毒(WDV)基因组上的CP、MP、Rep、RepA作为候选基因分别克隆到植物双元表达载体pCHF3和PVX载体pgR107,证实RepA能诱导HR并引起植株体内过氧化氢的大量积累。无义突变表明RepA是在蛋白水平诱导HR,而且RepA在本氏烟、心叶烟、三生烟、普通烟等烟草寄主上诱导近乎100%的HR表型,但在番茄上不能诱导HR。对RepA进行了一系列N端和C端的缺失突变,瞬间表达检测证实RepA的N端对于其诱导HR是必须的,而C端2-7位的氨基酸以及与RBR蛋白互作的motif (LICHE) 对于其诱导HR几乎没有影响。亚细胞定位试验表明RepA定位在细胞核,其核定位特征能影响RepA诱导HR的效应。共表达试验表明WDV上其它基因的编码产物对RepA诱导HR没有明显的抑制或促进作用。在30℃的培养条件下,RepA不能在烟草上诱导HR,表明RepA诱导HR是温度依赖型的。通过沉默COI1基因和体外涂抹JA试验初步探明RepA诱导HR是JA依赖型的。农杆菌共浸润转GFP基因本氏烟试验发现RepA能抑制GFP基因诱导的局部沉默,表明RepA是一个PTGS抑制子。
英文主题词RepA; hypersensitive response (HR);Wheat dwarf virus (WDV);functional domain;signal molecules