研究显示银杏内酯B可能对神经干细胞的增殖和分化具有调控作用。本项目拟应用荧光定量PCR、Western blot等分子生物学技术,结合原位杂交和免疫细胞化学等形态学技术,在嗅脑毁损和毁损后注射银杏内酯B的大鼠,在体检测毁损后不同时相点大脑喙侧神经干细胞迁移流通道中神经分化调控因子Mash1和Id2的mRNA及蛋白表达水平的时空模式及变化规律。在此基础上,离体培养室管膜前下区神经干细胞,缺氧诱导其损伤,观察银杏内酯B对神经干细胞增殖和分化的调节作用。采用真核转染技术,增强和抑制Mash1和Id2的表达,检测神经干细胞增殖和分化的特征和数量,了解单一因子的作用。进一步运用免疫共沉淀和EMSA技术观察银杏内酯B是否通过影响Id2与E47蛋白结合从而抑制Mash1的作用。本项目的顺利完成将有助于阐明银杏内酯B在神经干细胞的分化调控机制中的作用,具有重要的理论意义和应用前景。
中药在神经干细胞增殖分化过程中作用的研究对中枢神经修复具有重要意义。本项目研究结果证实DNA结合抑制因子2(Id2)在脑室管膜前下区(SVZa)神经干细胞的发育学表达具有时空特征,提示Id2可能具有促进SVZa神经干细胞增殖和抑制分化的作用;银杏内酯B(GKB)则能促进SVZa神经干细胞分化后的神经突起生长和形态结构成熟,促进向神经元方向分化,上调细胞因子信号抑制因子2(SOCS2)表达,下调Id2表达,提示SOCS2、Id2可能是GKB对神经干细胞分化影响的重要因素。研究发现少突胶质前体细胞(PDGF-αR免疫阳性)在脑内分布具有不均一特性,主要分布在前脑和中脑,提示髓鞘再生过程中需要移行较远的距离,这可能是髓鞘再生困难的原因之一。本研究结果为GKB对神经系统疾病治疗和损伤修复等实验研究和临床应用提供一定的资料和基础。