稻瘟病菌温度敏感型基因突变体T-86不但与该菌萌发相关,而且与该菌的致病性相关。克隆这个基因并明确其功能具有重要的科学意义。按照研究计划,采用cosmid质粒表型互补的方法克隆了目的基因,并研究其结构,结果表明该基因的编码产物是N -乙基顺丁烯二酰亚胺敏感型连接蛋白受体;将目的基因与绿色荧光蛋白基因(GFP)相连接,构建了融合载体,转化稻瘟病菌野生型菌株的原生质体,研究了目的基因在分生孢子、芽管、附着胞、菌丝中的都有表达;构建目的基因的沉默RNAi质粒载体,通过农杆菌转化野生型菌株的分生孢子,筛选获得强烈抑制目的基因表达的突变体,通过定量荧光PCR分析了该基因的表达特性。比较分析了RNAi 突变体与野生型菌株及温度敏感型突变体的表型差异,表明RNAi 突变体的芽管生长和菌落生长缓慢,致病性明显下降。综合分析结果表明,该基因与稻瘟病菌的萌发、菌落生长、致病性相关。本研究的结果加深了我们对稻瘟病菌致病机制的了解.
英文主题词Rice blast fungus; Gene cloning; RNAi; functional analysis; pathogenicity