中文摘要：

在前期工作中发现14-3-3σ（即Stratifin）表达下调与鼻咽癌转移有关，是一个关键的p53调控信号分子。本研究通过靶向蛋白质组学技术（串联亲和纯化结合质谱）获得14-3-3σ的相互作用蛋白网络;通过聚类分析、信号通路和蛋白相互作用分析发现两个关键相互作用组14-3-3σ/EGFR/Keratin 8相互作用组调控细胞骨架信号通路和14-3-3σ/p53/RAB7相互作用组调控囊泡转运信号通路与鼻咽癌侵袭转移有关；免疫组化和Western blot检测相互作用组蛋白之间表达的相关性及与鼻咽癌临床病理特征的联系；免疫荧光标记和激光共聚焦分析相互作用组蛋白的细胞内定位、结合；通过建立14-3-3σ表达缺失或过表达细胞系，研究14-3-3σ表达水平对鼻咽癌细胞生物学行为、侵袭转移能力、转移相关蛋白及转移相关信号通路的影响。阐明14-3-3σ相互作用蛋白网络在鼻咽癌转移中的作用和分子机制。

结论摘要：

14-3-3σ（即Srtratifin，SFN）是一种上皮特异性标记物，具有调控细胞增殖、细胞周期、凋亡等多种重要的生理功能，它受p53直接转录调控，被认为是一种肿瘤抑制蛋白。本课题组在前期研究中发现14-3-3σ低表达与鼻咽癌（NPC）侵袭转移有关；有关14-3-3σ在NPC中下调的分子机制目前尚不清楚。目前，国内外研究发现，14-3-3σ在肿瘤发生发展中具有重要作用，其分子其机制研究尚处于初步阶段。本课题在前期工作基础上，选取14-3-3σ作为目标蛋白，首先通过采用串联亲和纯化（TAP）、SDS-PAGE结合质谱技术鉴定了111个14-3-3σ的相互作用蛋白，绘制了在NPC发生发展过程中的14-3-3σ蛋白质相互作用分子网络图谱；通过生物信息学分析发现16个相互作用蛋白涉及到细胞骨架信号通路，5个相互作用蛋白涉及到囊泡转运信号通路；其中，14-3-3 σ/EGFR/keratin 8相互作用组之间具有紧密的相互作用，NPC细胞系中14-3-3 σ能下调EGFR和Keratin 8的表达，14-3-3 σ/EGFR/Keratin 8调控细胞骨架与NPC侵袭转移有关。本课题按照计划已经基本完成了相关科研工作，并在此基础上有了一些创新性发现，为进一步研究其下调的分子机制，课题组构建了14-3-3σ过表达的细胞系5-8F-14-3-3 σ(+)和对照细胞系5-8F-14-3-3 σ(-)，再通过miRNA基因芯片检测两个细胞系之间的差异miRNAs表达谱，结果发现14-3-3σ高表达后，其中上调的miRNAs有58个，而下调的miRNAs有181个；生物信息学分析发现，miR-597-5p可能是14-3-3σ的首选靶miRNA，进一步通过qRT-PCR检测发现14-3-3σ表达水平与miR-597-5p存在负相关，miR-597-5p可靶向14-3-3σ下调其mRNA水平与鼻咽癌侵袭转移有关，其下游涉及到相关信号通路及具体分子机制正在进一步研究中；miR-597-5p靶向调控14-3-3σ的双荧光素酶报告基因系统实验也正在进行当中，相信后续的研究将有助于进一步阐明miR-597-5p靶向14-3-3σ调控其下游相关信号通路的具体分子机制，为NPC临床上靶向治疗提供实验和理论依据。