由于缺乏乙肝病毒(HBV)自然感染的细胞培养系统,宿主蛋白如何参与HBV 感染过程是研究中的难点。鸭乙型肝炎病毒(DHBV)与HBV同属于嗜肝DNA 病毒科,我们利用DHBV自然感染鸭原代肝细胞(PDHs)模型,借助蛋白组学技术分析不同培养条件下对DHBV易感性差异显著的PDHs的蛋白谱以及DHBV感染对PDHs蛋白表达的影响,鉴定差异蛋白,以寻找鸭原代肝细胞中与病毒易感性或感染相关的宿主蛋白,筛选到与DHBV 结构蛋白DHBpreS/S相互作用的鸭细胞蛋白ANX2与HPPD,证明其与DHBpreS/S在细胞内共定位,ANX2与DHBpreS/S共定位于胞浆膜附近,而HPPD则共定位于细胞核,免疫共沉淀证明DHBpreS/S与ANX2与HPPD有相互作用。设计和筛选鸭ANX2 siRNA干扰片段,发现siRNA A2-701可抑制鸭ANX2 mRNA的转录和表达。利用鸭ANX2 siRNA结合DHBV 攻击,实验结果显示siRNA干扰ANX2表达后,细胞内和细胞培养上清中的DHBV降低,提示ANX2在DHBV的感染过程发挥一定作用,为研究乙型肝炎病毒感染的分子机制奠定基础。
英文主题词Hepadnavirus; duck hepatitis B virus;proteomics; virus-host cell interation