本项目采用全内反射荧光显微术(TIRFM)观测生物大分子晶体生长过程中晶体/溶液界面处生物大分子的吸附情况. 研究内容主要有: 一、区分吸附分子的吸附状态, 观察吸附分子在界面上的分布情况, 分别获得不同吸附状态分子的吸附动力学数据, 以及吸附数量与台阶密度、高度的关系, 寻找晶体生长的物质输运过程(微观过程)与晶体质量(宏观结果)之间的关系;二、通过对杂质分子吸附的观察, 区分其与正常生物大分子
本项目采用全内反射荧光显微术(TIRFM)结合激光共聚焦显微镜(LCM)观测了溶菌酶晶体处于平衡条件下晶体/溶液界面处溶菌酶分子的吸附情况。将TIRFM和LCM的观测图进行对比,从而得到吸附分子在晶体表面吸附的数量和位点随吸附时间的变化情况。本项目采用了具有不同台阶密度或并聚台阶高度的溶菌酶籽晶,采用嫁接了若丹明分子的溶菌酶分子作为荧光指示剂,得到了溶液分子在吸附到晶体表面后在特定位点的吸附情况,并根据吸附到晶体表面的分子在某个位置停留的时间长短判断出吸附分子的吸附状态。结果表明,溶菌酶分子在晶体表面的吸附可分为物理吸附和化学吸附二类;在吸附的初始阶段,二类分子的吸附等温线与传统的吸附等温线有所不同, 吸附过程中存在着诱导时间阶段,诱导时间的长短与发生吸附的类型无关;诱导时间前后在晶体表面不同位置发生吸附的不同类型的分子的比例有很明显的变化;在晶体表面台阶处发生化学吸附的分子,其诱导时间随台阶密度的增加而变短,其数量随并聚台阶高度的增加而线性增加。