中文摘要：

从大肠癌细胞（HRT-18）中提取mRNA建立cDNA表达文库，用大肠癌特异性噬菌体人抗体CH209、CH273、CH205筛选文库，在数据库中鉴定阳性克隆cDNA序列和相应氨基酸序列，用RT-PCR，Northern Blot，Western Blot 等方法分析新的大肠癌抗原基因在组织和细胞中的表达分布；并合成新基因的抗原肽体外诱导CTL。探讨结合噬菌体抗体库技术建立一种克隆人类肿瘤抗原基因的新方法，为寻找更多和更特异的肿瘤抗原奠定基础。

结论摘要：

本研究用人大肠癌细胞株HRT-18 mNA构建大肠癌cDNA表达文库，其文库含6.5×10(6)个重组子,重组率>96%,扩增文库滴度为1.1×10(9)pfu/ml,插入片段平均长度为1.1kb。免疫学方法筛选共获得2个新的大肠癌抗原基因，测序后生物信息学及RT-PCR、Northern blot分析发现其在结直肠癌组织中的表达增高，在其他肿瘤组织中表达也较对应正常组织表达增高，在其他正常组织基本不表达或者低表达。合成大肠癌抗原基因的抗原肽，体外刺激人外周血来源的单核细胞， MTT检测发现当效靶比达到401时，对HRT-18细胞的增殖起到明显抑制和杀伤作用。流式细胞仪检测表明随着抗原诱导时间增加CD8+细胞也逐渐增加，以抗原浓度为10ng/ml时最为明显。ELISA检测发现IL-2、TNFα、INFγ等细胞因子当刺激二周后浓度达最高，然后逐渐减弱。以上实验表明应用抗大肠癌特异性噬菌体抗体用于大肠癌细胞cDNA表达文库筛选新的大肠癌抗原基因是可行的，所筛选的大肠癌抗原能诱导细胞免疫反应，为进一步实验提供了依据。