中文摘要：

毛囊的发生发育依赖于一系列信号因子的相互作用，Wnt家族是该过程所必需的和最早出现的信号之一。研究表明，Wnt10b是Wnt家族中能够诱导皮肤细胞向毛囊方向分化的独特成员；我们的前期研究亦提示，胚胎期表皮Wnt10b的表达早于毛囊基板的形成，且基板形成时表皮基底层Wnt10b水平显著积聚上调。鉴于表皮基底层是表皮干细胞的储存库之一，且基板形成是毛囊发育启动的标志，我们提出"Wnt10b激活表皮干细胞诱导毛囊再生的启动"，并拟利用荧光免疫组化、基因工程、RNA干扰、APA微囊成囊技术、组织培养、模型构建等方法探讨Wnt10b诱导表皮毛囊基板的形成及其可能机制，并研究（1）Wnt10b对毛囊发生发育的早期重要作用；（2）Wnt10b诱导表皮基底层"类基板"形成及此时表皮干细胞的激活和走向；（3）Wnt10b体外调控表皮干细胞的活化分化；（4）Wnt10b诱导的"类基板"能否发育为完整毛囊。

结论摘要：

本项目按计划完成了 1.观察SD大鼠胚胎背部皮肤毛囊的形态发生和Wnt/β-catenin信号在毛囊发育过程中的表达。SD大鼠背部皮肤最早期的毛囊发育启动于胎龄15.5-16d,基本结束于出生后第3d;Wnt10b 与β -catenin 参与启动毛囊的形态发生和毛囊的进一步发育。 2.构建适合研究毛囊发育启动的胎鼠皮肤体外器官培养模型,观察nt10b 与β -catenin 信号在该模型毛囊发育过程中的时空表达。在体外短期培养的胎鼠背部皮肤毛囊发育及Wnt/β-catenin信号的表达与体内基木一致,可以作为研究毛囊发育启动的模型，Wnt/β-catenin信号的表达与毛囊的发育密切相关。 3.利用基因工程技术获得人Wnt10b基因真核表达载体,将其转染COS-7细胞并检测其在COS-7细胞中的表达。COS-7细胞能够表达重组Wntl0b蛋白,这为研究Wni10b在毛囊发育过程中的作用及其机制提供一个有利的研究工具。 4.观察基因工程重组的人Wnt10b蛋白能否促进大鼠胚胎皮肤毛囊的发育和探讨其潜在机制。当胎鼠背部皮肤在体外培养时,Wnt10b蛋白促进皮肤的毛囊发育,而且,Wnt10b蛋白很可能通过经典的Wnt信号通路调控细胞β-catenin水平来发挥作用的。 5.利用RNA干扰技术抑制体外培养的胎鼠皮肤Wnt10b蛋白的表达,观察沉默Wnt1Ob基因的表达能否抑制毛囊的发育和探讨其潜在机制。在体外器官培养的环境中,siRNA能够抑制胎鼠背部皮肤组织Wnt10b蛋白的表达,从而抑制毛囊发育的启动,减少新形成毛囊的数量;siRNA与胎鼠皮肤的体外器官培养结合,可以模拟转基因鼠的基因敲除;Wnt10b与β-catenin的mRNA表达没有直接关系,但可能在蛋白水平上调控细胞β-catenin的表达。