提取Vero细胞膜蛋白,利用表达纯化的禽肺病毒(aMPV)F蛋白与人IgG Fc融合蛋白和能与Fc结合的蛋白A进行免疫沉淀,结合质谱分析确定aMPV的受体蛋白。选用两种方法进行受体的功能验证一种是利用HIV或VSV-G假性反转录系统和aMPV F蛋白表达载体共转染多种细胞系,获得假型病毒,筛选出aMPV非敏感细胞系,然后将推测的受体基因导入非敏感细胞系使其变为敏感细胞系,进行病毒感染试验验证。另一种是利用慢病毒载体携带shRNA沉默受体基因构建缺陷型细胞系,进行病毒感染试验验证。将多种细胞系(包括缺乏受体的)分成三组病毒高水平复制组,病毒低水平复制组和无病毒复制组,建立实时荧光定量RT-PCR检测这三组细胞系以及实验鸡不同组织部位中受体基因的表达差异,研究受体与aMPV复制的相关性和组织嗜性。通过构建F蛋白突变体,进一步确定F蛋白与受体结合的功能域。
英文主题词Avian Pneumovirus;Fusion protein;Receptor;Identification;