本项目建立了一种以毛细管电泳为基础的在线酶分析检测实验平台,将一种新型的微进样技术- - 光快门漂白进样技术与在线毛细管电泳酶分析技术结合,对酶活性和酶反应动力学进行在线测定和研究,快速、准确、高效地获得酶反应及酶抑制反抑制反应的动力学数据。项目研究利用该实验平台,实现了对胰酶切蛋白酶反应全程的高时间分辨的在线测量;研究了谷氨酸的GDP-GTP双酶反应动力学,利用双酶底物循环反应,可以更准确有效地测定生物体系中的痕量谷氨酸含量;在毛细管电泳分离方面,利用功能化的纳米金粒子有效地提高了毛细管电泳手性分离的效率。项目研究表明,光快门进样技术具有少量进样的精确和多次进样的重现性等优点,同时突破了激光诱导荧光检测对反应底物的苛刻要求,结合在线毛细管电泳酶分析技术,该酶分析实验平台提高了酶活性和酶反应动力学测定准确性,帮助我们深入了解酶活性和酶反应动力学机制,以及实现酶抑制剂的高通量筛选,对生物酶学以及抑制剂类药物的研发具有重要的实验意义和应用价值。
英文主题词on-line enzyem assay;optically gated photobleaching sample injection; capillary electrophoresis; enyzme reaction and inhibition