中文摘要：

缺血性心律失常极易诱发房颤和室速/室颤，甚至可导致猝死，严重威胁人类健康。microRNA在缺血性心律失常病理生理过程产生至关重要的作用，成为目前心血管领域研究热点。前期的研究结果显示，大鼠心肌梗死诱发的缺血性心律失常的模型中miR-30有显著升高，提示miR-30很可能参与了缺血性心律失常心肌离子及电生理的调节，可能作为具有抗心律失常药物的新靶点。本项目拟用Realtime RT-PCR、蛋白印迹、膜片钳等技术研究大鼠心肌梗死模型miR-30表达水平及作用，内容包括:在整体水平上研究miRNA表达的作用及对其下游靶蛋白mRNA水平，蛋白表达及电流的作用；在细胞水平上研究缺氧心肌miRNA表达及作用；转基因鼠上研究miR-30的作用机制。本项目的完成将深入阐明 microRNA 在缺血性心律失常中的作用；揭示药物抗心律失常的新靶点，并为其治疗心律失常提供理论基础和实验依据。

结论摘要：

一、本项目按原计划成功构建了建立缺血-心律失常模型，应用实时定量RT-PCR技术测定各组心肌组织 miR-30c水平的变化，发现心肌梗死大鼠的心肌组织miR-30c明显升高，是假手术组的3.7倍。同时监测其心电图，采用心脏点注射在体转染AMO-30c研究敲减miR-30c，观察在缺血性心肌梗死模型的大鼠心电图的变化，发现在体抑制过表达miR-30c组的大鼠心律失常的持续时间、室速和室颤的发生率、心律失常评分以及死亡率都有所降低，说明高表达的miR-30c可能是诱发心律失常的关键因素之一。二、在缺血-心律失常模型我们发现大鼠心肌缺血时房室传导阻滞的发生率明显增加，同时miR-1的表达水平也明显增加。心肌梗死患者中房室传导阻滞的发生率为13.9%，检测患者血浆发现miR-1含量水平明显升高。与野生型小鼠（WT）相比miR-1转基因鼠中miR-1明显升高，房室传导阻滞发生率显著增加，connexin43蛋白相对于野生型小鼠表达明显下调。miR-1转基因小鼠心肌中的ICa,L及IK1流密度比野生型小鼠心肌明显降低。与野生型相比，miR-1转基因鼠心肌收缩期[Ca2+]i升高幅度明显降低，但是静息期[Ca2+]i明显升高。miR-1转基因小鼠尾静脉给予LNA- anti-miR-1后，过表达的miR-1被抑制，恢复了miR-1过表达时降低的ICa,L，IK1电流密度。同时使收缩期[Ca2+]i升高幅度增加。在缺血的心肌中miR-1的过表达导致心肌发房室传导阻滞易感性增加，这为我们治疗缺血性心律失常提供新的治疗视角。三、心肌肥厚和心肌缺血关系密切，我们发现miR-328可能成为临床防治心肌肥厚的潜在治疗靶点。与野生型小鼠相比，miR-328 转基因小鼠心肌组织中miR-328的表达水平显著升高，心脏体积明显增大，心脏体重比也相应增加；心肌肥厚的标志物ANP、BNP、β-MHC mRNA表达水平也明显升高；同时伴随着胞浆钙浓度升高，Calcineurin蛋白和NFATc3核蛋白表达显著增加，而SERCA2a靶蛋白表达明显下调。MicroRNA-328（miR-328）过表达能够导致心肌肥厚，其主要作用机制是通过抑制SERCA2a，从而激活Calcineurin/NFATc3信号通路来导致心肌肥厚。