本项目以模拟疏水液相色谱的液/固体系为对象,构建了一套研究在液/固界面上获得天然及变性蛋白置换吸附焓的微量热方法。通过量热法测定了不同条件下四种蛋白在液/固界面上折叠时的置换吸附热效应,结合摇床法测得的相应条件下的吸附等温线,并按照计量置换吸附理论(SDT-A)及其热力学进行分析,研究疏水相互作用、蛋白分子构象变化、蛋白与固体表面之间的去水合以及伴随构象变化发生的水合或去水合分别对整个吸附折叠过程的贡献。用差示扫描量热法(DSC)和傅里叶变换红外光谱法,从分子和亚分子水平上测定了吸附态蛋白的热稳定性和二级结构元素含量,结合蛋白吸附前后生物活性的测定,探讨了蛋白折叠热效应、蛋白分子构象变化和生物活性回收率之间的关系。本研究是探讨蛋白折叠特性和规律的极其重要的途径,其研究成果会给人们对蛋白质在液/固界面上折叠机理的认识提供新的信息,更重要的是它对蛋白质工程下游研究所涉及的分离条件优化及提高基因工程技术产业化的水平,都有重大意义。
英文主题词microcalorimetry, adsorption displacement enthalpy, thermodynamic functions, protein refolding, conformational change