通过基因组步移的方法从牙鲆基因组中扩增到牙鲆Follistatin基因的基因组序列,通过RT-PCR的方法获得Follistatin基因的cDNA序列,发现Follistatin基因组可能编码两个有不同剪切的cDNA,其中一个的蛋白保守区比另一个多两个氨基酸,其编码的蛋白序列与其它动物的同源基因非常保守。通过定量PCR分析了骨骼肌细胞特异基因Myf-5,MyoD,myogenin在牙鲆胚胎发育时期表达量的变化与肌细胞发育情况间的联系,证实这三个基因间表达量的改变对应着肌细胞的增殖与分化。通过原位杂交及RT-PCR分析了Follistatin基因在牙鲆胚胎期及成体组织中表达,结果显示Follistatin在胚胎期表达在肌细胞中,与MyoD表达有部分重叠,而在成体的肌肉中却没有表达,这表明该基因参与了肌细胞的早期发生过程。构建了肌动蛋白轻链(mlc)启动子驱动的Follistatin并含有Tol2转座子识别元件的转基因载体以及含有Follistatin的体外合成RNA的表达载体,分析Follistatin的功能。
英文主题词Follistatin;Flounder,in situ hybridization; over-expression;myogenic regulatory factors