根据申请人克隆的斜带石斑鱼G型溶菌酶和两个抗菌肽cDNA序列,扩增获得这三个基因的全序列(包括调控区);在原核和真核细胞进行重组表达,测定表达产物的功能和抗菌谱;使用RNA干扰技术沉默这些基因,确定其在抗病中的作用;运用定量RT-PCR、Northern印迹、原位杂交、免疫组化和Western印迹等方法研究细菌感染、环境因子和免疫刺激剂等对这三个基因的表达的影响,确定它们的表达模式和调控机理。通过研究阐明非特异性免疫(溶菌酶和抗菌肽)基因在抵抗细菌感染中的作用;为石斑鱼的健康养殖提供理论指导;为开发有效的鱼用免疫刺激剂和非抗生素类药物提供理论依据,以减少抗生素的使用,促进水产食品和养殖环境安全。
获得了石斑鱼G型溶菌酶和两个抗菌肽cDNA,获得了两个抗菌肽基因的全长和基因结构。重组表达了G型溶菌酶,对溶藻弧菌、创伤弧菌、嗜水气单胞菌、副溶血弧菌、河弧菌、假荧光单胞菌等水产菌有溶菌活性;化学合成了两种抗菌肽,对多种水产细菌(副溶血弧菌、摩根尔摩根菌、食酸假单胞菌、创伤弧菌、脑膜炎脓毒性黄杆菌、溶藻弧菌、美人鱼弧菌、少动假单胞菌、施氏假单胞菌、温和气单胞菌、粪链球菌、阴沟肠杆菌、多杀性巴斯德杆菌等)的最低杀菌浓度低于5微摩尔每升M; 通过Northern印迹、RT-PCR、原位杂交等方法确定了溶菌酶和两个抗菌肽在正常鱼及细菌感染、免疫增强剂注射后的表达谱,发现G型溶菌酶在溶藻弧菌感染3天后在多个组织有明显上调;在细菌脂多糖注射后,两个抗菌肽在鱼肠道有明显的上调;克隆了DNA聚合酶Delta的P12亚基基因并对其表达进行了研究;构建了虹彩病毒感染不同时间抑制性消减杂交cDNA文库,获得补体途径、凋亡相关途径、细胞因子(趋化因子、干扰素相关因子)、泛素-蛋白酶体途径相关多个基因。