中文摘要：

探讨肝细胞癌的发生发展机制以及寻找关键的治疗靶点是肝癌研究热点。课题组以肝癌细胞凋亡相关蛋白CIDE-3为诱饵，应用酵母双杂交技术在人肝细胞cDNA文库中获得其相互作用分子LITAF，且已发现LITAF在肝癌组织中低表达并与癌组织分化呈负相关，并与突变型P53蛋白表达负相关。但目前LITAF在肝癌细胞中对分化的影响及其机制尚未阐明。本课题拟在此基础上，首先应用免疫印迹、免疫组化等方法阐明LITAF的表达与肝癌分化以及肿瘤生物学行为的关系；其次通过免疫组化、PCR等研究肝癌细胞不同分化阶段LITAF的转录、表达的变化，以及LITAF表达的高低对细胞分化的影响；第三探索LITAF与P53表达的相关性；最终还将应用功能分类的抗体芯片及基因芯片筛选出与LITAF相互作用的细胞分化相关分子。该课题为阐明LITAF介导的肝癌分化的机制研究奠定基础，也为肝癌分化治疗提供新思路。

结论摘要：

我们既往研究发现LITAF的低表达与HCC组织的分化和突变P53蛋白的表达负相关。但其机制不明确。我们应用免疫组织化学检测了60例HCC组织中，发现LITAF在HCC组织中的表达显著低于癌旁正常肝组织（P<0.05），并发现其在低分化HCC组织中表达最少，其次为中分化HCC组织中，最强表达于高分化HCC组织（P<0.05）。并且与Edmondson高分级、门静脉癌栓形成、AFP增加相关。其次，我们应用不同浓度全反式维甲酸（ATRA）诱导肝癌细胞HepG2，通过ELISA检测AFP分泌量减少，诱导后的HCC细胞增殖抑制，呈时间剂量依赖性，细胞LITAF的mRNA及蛋白水平均显著下调，也呈明显的剂量与时间依赖性。我们构建了LITAF的低表达HepG2细胞系，通过应用刮擦损伤、transwell以及流式细胞仪检测证实，在LITAF低表达的情况下，HepG2的增殖、侵袭、迁移及凋亡能力均显著增强（P＜0.05）。在此基础上，我们应用Affymetrix GeneChip PrimeView Human 芯片进行LITAF低表达细胞差异基因的筛选， 将差异基因进行Gene Ontology Analysis（GO分析），计算结果示与对照组相比，上调基因数364个，下调基因数505个。将所有筛选出的差异基因，进行Pathway富集分析。根据KEGG与BIOCARTA中所有pathway的基因信息，经过分析选取BIRC5, SKP2, CDKN2B and IL-8基因进行Western Blot验证，证实为LITAF的下游基因，而这四个基因均是HCC发生发展过程中与增殖、凋亡相关的关键分子。