中文摘要：

猪圆环病毒2型（PCV2）是近年来新发现的一种致病病原，给我国的养猪业造成了严重的危害。本研究欲在构建出PCV2感染性分子克隆的基础上，采用生物信息学分析方法对无致病性PCV1和有致病性PCV2的ORF2基因序列进行分析和比对，预测出抗原表位，采用SOEing技术改造或替换构成不同表位的基因，从而构建出系列感染性分子克隆突变株，并分别感染体外培养的猪肺泡巨噬细胞。通过比较不同的感染性分子克隆定向突变株对靶细胞－猪肺泡巨噬细胞功能的影响（包括对抗原递呈相关分子表达、细胞因子分泌、诱导细胞凋亡能力的影响），结合核苷酸序列一级结构特点，确定与病毒侵染靶细胞直接相关的PCV2核衣壳蛋白中的主要抗原表位，明确PCV2致病的分子基础，为深入阐明PCV2的分子致病机理、研制PCV2弱毒疫苗提供技术平台和有力的实验依据。

结论摘要：

本研究在构建出PCV2感染性分子克隆的基础上，采用生物信息学分析方法对PCV1和PCV2基因序列进行分析比对，找到主要抗原表位差异，采用定点突变技术成功构建出三株PCV2感染性分子克隆突变株。在建立了猪肺泡巨噬细胞(PAM)体外培养平台的基础上，使用PCV2系列突变株分别感染体外培养的PAM，通过比较不同感染性分子克隆定向突变株对PAM功能的影响，发现PCV2及其突变株感染PAM后均不能诱导细胞调亡，但在影响促炎性细胞因子TNF-α、趋化性细胞因子IL-8的转录及表达水平上存在一定差异。结合PCV基因组核苷酸序列一级结构特点，证实PCV2 ORF2第122位－127位氨基酸、第77位－78位氨基酸、第70位－83位氨基酸均为与免疫相关的线性表位所在区域，且第70、71、122、127位氨基酸的改变与PCV2感染后上调IL-8 基因mRNA的表达有关，是PCV2核衣壳蛋白中的主要抗原表位。本项目从技术上成熟了构建PCV感染性克隆及突变株的操作，为深入研究PCV2分子致病机理开辟了新途径；从理论上证实了PCV2 ORF2上的四个与功能相关的位点，为深入阐明PCV2的分子致病机理奠定了基础。