首先,观察了上皮型钙粘蛋白(E-cadherin)基因在小鼠胚胎干(ES)细胞体外分化中的表达水平及与细胞黏附力的关系,发现E-cadherin于分化第1天无表达,第5天EB形成后表达最强,其后表达又逐渐降低,期间分化细胞黏附能力也表现为由弱到强再变弱。然后,构建E-cadherin基因的真核表达载体pEGFP-E-cadherin并转染入BALB/c小鼠ES细胞,转染后ES细胞自分化第1天至17天持续高表达E-cadherin,细胞黏附能力明显增强,19天时仍能保持致密的细胞连接并呈多层生长状态。再次,选用前期诱导方法和三维培养技术,诱导E-cadherin-ES细胞向肝脏组织结构分化,利用ICC、FCM、免疫电镜等技术检测到肝脏组织标记物(ALB、GGT、尿素等)的表达、肝细胞和BE细胞出现紧密细胞联接、荧光素由肝细胞向BE细胞单向排泌,认为分化系统中出现类胆管和类肝组织结构。最后,观察了E-cadherin在类肝组织分化形成中的动态时空表达,得出结论为其在细胞膜持续稳定表达以维持必要的细胞黏附力是分化细胞组织化的重要机制。
英文主题词E-cadherin;gene transfection;ESCs;liver tissue;inducing differentiation