中文摘要：

野生稻是重要的遗传资源。为了更好地研究和克隆药用野生稻中有利基因，我们利用新一代可转化的双元细菌人工染色体（BIBAC）载体构建了第一个药用野生稻基因组文库。在此基础上，以定位的抗褐飞虱、白背飞虱、白叶枯病等抗性分子标记为探针筛选文库，进行转化鉴定，建立适于BIBAC系统的水稻大片段DNA的转化技术体系，研究外源大片段DNA的整合机制，并克隆出有关重要的野生稻基因。该项研究将为野生稻优良基因的发掘

结论摘要：

为了更好地研究和克隆药用野生稻中有利基因，我们利用新一代可转化的细菌人工染色体即双元细菌人工染色体（BIBAC）载体构建了第一个药用野生稻基因组文库。应用本实验室已定位的与抗褐飞虱基因Bph14 （Qbp1）和Bph15（Qbp2）紧密连锁的分子标记为探针，筛选药用野生稻BIBAC基因组文库，得到相关阳性克隆，将这些克隆的质粒通过电击转化法转到特定的农杆菌中。通过比较不同的受体材料，不同的预培养、共培养条件，不同的去除农杆菌及选择阳性愈伤的方式等对转化效率的影响，建立了适合水稻BIBAC系统的转化体系。在此基础上，从文库中筛选插入片段大小不同（55 kb-120 kb）的BIBAC克隆，通过农杆菌介导的转化方法，转化栽培稻H1493和中花11，获得一大批转化株系，对转基因植株进行验证及表型鉴定。结果表明，利用BIBAC系统进行的大片段转化与农杆菌介导的普通的双元载体转化之间的最大区别是大片段转化需要额外的毒性基因virG/virE的参与；而且在转化机制（如插入拷贝数）上存在差异。这套系统的建立将为野生稻优良基因的发掘和利用开拓途径。