中文摘要：

本项目旨在保持防御素基本生物学特性的基础上，筛选具有高效、特异抗病毒活性的人α防御素5（HD-5）突变体，并对其功能进行验证。为此，我们首先建立了一种基于寡核苷酸合成和定点随机突变结合长臂引物PCR产生突变体的方法，并连续2轮成功构建HD-5突变体(mHD-5）cDNA文库。然后利用位点特异性重组技术，将mHD-5单拷贝整合入Flp-In-CHO细胞基因组中进行分泌性表达，通过抗性筛选获得可一致性表达mHD-5的细胞克隆库。随后，结合细胞病变观察和CCK-8分析技术，以HSV-2为压力筛选对象，对单克隆表达分泌的mHD5进行抗病毒活性筛选，并最终获得一种比天然HD-5具有更强抗病毒活性的突变体。测序分析发现，所筛选出的mHD-5是在天然HD-5的基础上，其第15位的丝氨酸（S）和第21位的谷氨酸（E）均被突变为精氨酸（R）。进一步完成了HD-5突变体的化学合成和抗病毒(HSV-2和HPV-16)活性与细胞毒性验证；并且开展了该多肽的基因工程小试制备，解决了多肽药物基因工程制备工艺中的一些技术难题。通过本项目研究，为寻找和研制高效、低毒抗病毒药物提供了新思路、新方法。