分析体内的成人和胚胎RPE细胞以及体外培养的成人RPE细胞是否表达色素合成所必需的五种蛋白调控物质酪氨酸酶(TYR)、酪氨酸酶相关蛋白-1(TYRP-1)、酪氨酸酶相关蛋白-2(TYRP-2)、P蛋白、MC1R,阐明上述蛋白在RPE细胞内的表达。根据上述结果,对于缺乏某种蛋白表达的细胞,通过基因转染方法来明确该细胞是否可以合成色素;对于全部表达五种蛋白的细胞,采用基因干预抑制某一特定基因的表达,进一步确定上述蛋白在色素合成中的作用机理。利用酵母双杂交技术,以色素合成相关基因为诱饵,在表达文库中筛选与诱饵相互作用的蛋白,进一步采用免疫共沉淀技术验证,从而找到蛋白之间的联系,获得更多的调控蛋白信息。根据上述结果,综合分析,阐明RPE细胞色素合成调控机制。有望获得使体外RPE细胞合成色素的方法,为年龄相关性黄斑变性的发病机理及防治研究提供新的理论基础,并应用于新药研发领域。
分析体内的成人和胚胎RPE细胞以及体外培养的成人RPE细胞是否表达色素合成所必需的五种蛋白调控物质酪氨酸酶(TYR)、酪氨酸酶相关蛋白-1(TYRP-1)、酪氨酸酶相关蛋白-2(TYRP-2)、P蛋白、MC1R受体,阐明上述蛋白在RPE细胞内的表达。根据上述结果,对于缺乏某种蛋白表达的细胞,通过基因转染方法来明确该细胞是否可以合成色素;对于全部表达五种蛋白的细胞,采用基因干预抑制某一特定基因的表达,进一步确定上述蛋白在色素合成中的作用机理。利用酵母双杂交技术,以色素合成相关基因为诱饵,在表达文库中筛选与诱饵相互作用的蛋白,进一步采用免疫共沉淀技术验证,从而找到蛋白之间的联系,获得更多的调控蛋白信息。根据上述结果,综合分析,阐明RPE细胞色素合成调控机制。