百合无症病毒(LSV)是导致百合球根退化的主要病害,到目前为止还没有很有效的方法来防治。RNA 干扰作为一项新的反向遗传学技术,正在越来越多地应用于植物病毒抗性研究,为工程化植物抗病毒遗传育种提供了一个高效、特异的抗性获得手段。本研究运用基因扩增、Gateway技术和转基因技术,以及植物中转录后基因沉默-PTGS的作用原理,设计合适dsRNA与Gateway表达载体相连后,通过农杆菌介导法将病毒的特定siRNA导入百合,通过瞬时表达检测和PCR检测,证明RNAi在百合病毒防治上的有效性,并获得了抗病性植株。利用PCR重组技术构建百合无症病毒和百合斑驳病毒(LSV-LMoV)双抗表达载体,分别转化东方百合"索邦"和铁炮百合"白天堂"子球鳞片,同时确定可作为定量分析的内参基因,通过RT-PCR实时定量检测,获得了22%和8%的转基因个体。通过生物信息学软件,分析了百合无症病毒衣壳蛋白(CP)基因和复制酶(RdRp)基因的碱基序列、编码蛋白结构和功能。进一步优化了无病毒百合组培种球培养条件,建立了组培种球快速繁殖体系,为根治百合病毒病,解决我国百合种球依赖进口的现状提供了理论参考。
英文主题词Lily symptomless virus; RNA interference; siRNA; Sequence analysis ;Genetic transformation