中文摘要：

在"正气存内，邪不可干" 和"肾主骨生髓"的中医理论指导下，结合临床应用补肾中药治疗乳腺癌骨转移的长期实践，提出假说骨质疏松状态下的骨的微环境有利于乳腺癌骨转移的发生；补肾中药通过OPG/RANKL/RANK信号传导通路逆转乳腺癌细胞对破骨细胞分化过程的影响。以细胞学、分子生物学、显微影像学等技术为平台，在骨质疏松造模基础上进行乳腺癌骨转移造模，观察骨质疏松状态对乳腺癌骨转移的影响。通过体外模拟乳腺癌骨转移微环境和体内骨质疏松状态下乳腺癌骨转移造模实验，观察乳腺癌细胞对OPG/RANKL/RANK系统的影响，以及温肾阳、益肾阴和阴阳平补的补肾中药干预对OPG/RANKL/RANK系统关键靶点的不同作用，探讨补肾中药治疗乳腺癌骨转移的作用机制。

结论摘要：

乳腺癌骨转移是乳腺癌最常见的远处转移。骨转移患者伴发一系列骨相关事件，严重影响患者的生活质量，缩短生存期。基于“正气存内，邪不可干”和“肾主骨生髓”的中医理论，我们在临床上广泛应用补肾中药治疗乳腺癌骨转移，并取得了良好的疗效。因此，本研究提出两个假说第一，骨质疏松状态下的骨的微环境有利于乳腺癌骨转移的发生；第二，补肾中药能通过OPG/RANKL/RANK信号传导通路逆转乳腺癌细胞对破骨细胞分化过程的影响，减轻乳腺癌细胞对骨质的破坏。通过对裸鼠去势3周造成骨质疏松模型后再予左心室注射MDA-MB-231BO-GFP-Luc2细胞造成骨转移模型，生物发光法检测假手术组、去势组及各药物干预组裸鼠骨转移的发生，并进一步检测裸鼠乳腺癌骨转移灶中OPG/RANKL/RANK信号传导通路相关基因和蛋白的表达以探讨补肾中药治疗乳腺癌骨转移的可能机制。研究发现，假手术组在这左心室注射造模后3、4、5周时出现的转移例数与总例数的比值分别是5/7、3/7、2/5，去势组的比值为3/7、5/7、5/5。reeal-time PCR和western blot的检测均发现，与假手术组相比，去势组在药物干预4周和5周时，骨转移肿瘤组织中的PTHrP的表达均高于假手术组，提示骨质疏松状态下的骨骼更容易发生乳腺癌骨转移。与假手术组相比，造模成功后的3-5周内，去势组TGFβ蛋白表达均高于假手术组。因此，我们初步认为骨质疏松对乳腺癌骨转移具有促进作用。进行药物干预后，实验组骨转移数均低于去势组。其中以右归组的疗效最佳。说明补肾中药对于乳腺癌骨转移有一定的治疗效果，其中以温肾中药的疗效最佳。real-time PCR检测结果提示药物干预3周时，与去势组相比，左归组和右归组骨转移肿瘤组织中OPG、PTHrP的表达均高于去势组，且左归组骨转移肿瘤组织中RANK的表达高于去势组；从western blot的检测结果来看，与去势组相比，给予补肾药物治疗的裸鼠在给药后3-5周内，OPG的表达均高于去势组。TGFβ的表达部分低于去势组，而TGFβR2的表达则高于去势组。说明用药后破骨细胞的激活被抑制。在用药4w后和用药5w后，右归组和左右归组PTHrP的表达低于去势组。说明补肾中药，尤其是温肾阳的中药可能通过下调PTHrP的表达，从而上调OPG的表达，从而促进骨形成，稳固骨结构。