中文摘要：

RNA干涉（RNA interference, RNAi ）通过双链RNA介导特异性降解相应序列mRNA，从而阻断基因表达。RNAi已被用于病毒感染防治和肿瘤治疗以及造血干细胞等方面研究。我们将RNA干涉应用于HCV感染基因治疗研究。我们首先使用小干涉RNA（siRNAs）表达框架体系在细胞内转录出HCV特异siRNAs，检测其对HCV基因表达的抑制作用，据此筛选有效siRNAs来构建质粒载体和逆转录病毒载体。将表达siRNAs的质粒载体或逆转录病毒载体转染稳定表达HCV部分基因和荧光素酶融合蛋白的Huh7细胞，通过NorthernBlot及观察荧光素酶的活性来检测RNAi对HCV基因表达的抑制效果。同时比较Huh7细胞内HCV特异性siRNA、核酶、脱氧核酶对靶序列的切割效率的高低。希望据此为HCV感染找到一个新的解决途径，并进一步对在哺乳动物细胞内实现RNAi的基础研究

结论摘要：

我们在实验中构建了三个靶向HCV 5'NCR及核心区、一个靶向荧光素酶、一个随机对照的小干涉RNA表达质粒，经酶切鉴定和测序证实插入片段完全正确。然后大量抽提制备上述质粒用于转染。结果如下与对照组相比，靶向HCV 5'NCR的shRNA表达质粒PsilencircleA使HL-7702细胞中共转染的HCV 5'NCR和C区的蛋白表达结果下降46%。靶向HCV 5'NCR的shRNA表达质粒PsilencircleB使HL-7702细胞中共转染的HCV 5'NCR和C区的蛋白表达结果下降38%（P<0.01）。靶向HCV C区的shRNA表达质粒Psilencircle D使HL-7702细胞中共转染的HCV 5'NCR和C区的蛋白表达明显下降49%（P<0.01）。靶向pCMV/T7 NCRCΔ-luc中荧光素酶报告基因设计的shRNA表达质粒PsilencircleE，使荧光素酶的表达下降55%。本研究采用shRNA质粒表达载体在体内转录HCV特异性siRNA，在细胞水平上成功抑制HCV 5'NCR和C区表达，证实此HCV特异性 shRNA表达载体确实具有基因阻断功能。