现有疫苗的研究多是从病原体基因组和蛋白质信息出发,根据其功能研制疫苗,由于缺乏直接的生物体信息,疫苗往往是预防对象单一、免疫效果欠佳、针对性差。本研究选择乙肝病毒为研究对象,与生物信息学相结合,基于蛋白芯片高通量的优势,制备出乙肝病毒相关蛋白的表位谱肽芯片,并用该芯片筛选出中国人群中乙肝病毒的优势中和抗体,分析得到其所对应的抗原表位肽。将该抗原表位肽免疫动物,鉴定该单表位肽的免疫原性,并制备单表位肽抗体,鉴定该抗体是否具有中和抗体的能力;再将筛选抗原表位肽制备成亲和色谱纯化HBsAb(+)抗血清并鉴别其中的抗体是否为中和抗体;通过进一步筛选,得到可以作为疫苗使用的优势抗原表位肽。该方法对于研究适合中国人群的乙肝疫苗具有重要意义,也对病原微生物的紧急预防提供快速制备新型疫苗的良好思路。
Hepatitis B virus;Epitope spectrum microarray;Epitope peptide;neutralizing antibody;vaccine
本研究选择乙肝病毒为研究对象,采用生物信息学方法对乙肝病毒的表面抗原进行分析,筛选出11条B细胞表位肽;制备了乙肝病毒表面抗原蛋白的表位谱肽芯片,同时利用荧光偏振分析方法的高通量优势,进一步筛选出具有较强抗原性的10条乙肝病毒表面抗原表位肽;收集抗HBV表面抗原阳性的抗血清,对上述10条乙肝病毒表面抗原表位肽进行筛选,得到3条具有广泛结合能力的抗原肽;固相合成此3条表位肽,将该抗原表位肽免疫动物,鉴定此单表位肽的免疫原性,并制备单表位肽抗体,鉴定该抗体是否具有中和抗体的能力;再将筛选抗原表位肽制备成亲和色谱纯化HBsAb(+)抗血清并鉴别其中的抗体是否为中和抗体;通过上述筛选和鉴定,得到的3条表位肽对抗血清的阳性率为51.9% ,敏感性和特异性分别为84.3% 和98.2%;初步认为它们是可以作为疫苗使用的乙肝病毒表面抗原的优势抗原表位肽。该方法对于研究适合中国人群的乙肝疫苗具有重要意义,也对病原微生物的紧急预防提供快速制备新型疫苗的良好思路。本研究培养硕士研究生2名;发表国外SCI收录论文5篇。