补肾冲剂是治疗慢性乙型肝炎的有效验方,临床应用有抗炎、抗病毒作用,抑制HepG 2215细胞株HBV表达。既往研究证实先天肾气不足者,先天免疫存在异常。先天免疫是特异性免疫启动者,先天免疫模式识别受体(PRRs)识别病原体,启动并激活先天免疫与特异性免疫。乙肝病毒(HBV)阻抑PRRs活化,致先天免疫和特异性免疫低下,肝内持续炎症。鉴此,我们提出"补肾冲剂通过调节PRRs及相关抗病毒、炎性信号通路抗HBV"的假说。本课题应用HepG 2215细胞株研究补肾冲剂对与特异性免疫相关的PRRs基因(TLRs、RLRs、NLRs、ALRs、ZBPs)表达的影响;将PRRs激动剂和中药加入细胞培养基,检测IRF3/IRF7/I型干扰素抗病毒信号通路和NF-κB/TNFα及IL-β炎性信号通路的变化,研究补肾冲剂对PRRs抗病毒和炎性信号通路的调节作用,丰富慢乙肝"肾虚为本"中医病机理论的现代医学内涵
Bushen;innate immunity;pathogen recognition receptors;HBV;
先天免疫是特异性免疫启动者,先天免疫模式识别受体(PRRs)识别病原体,启动并激活先天免疫与特异性免疫。乙肝病毒(HBV)阻抑PRRs 活化,致先天免疫和特异性免疫低下,肝内持续炎症。本课题应用HepG2.215细胞株研究补肾冲剂对与特异性免疫相关的PRRs基因(TLRs、RLRs、NLRs、ALRs、ZBPs)表达的影响;将PRRs 激动剂和中药加入细胞培养基,检测IRF3/IRF7/I 型干扰素抗病毒信号通路和NF-κ B/TNFα 及IL-β炎性信号通路的变化。研究结果发现1. 补肾冲剂组TLRs中TLR3 mRNA、TLR4 mRNA、TLR7 mRNA、TLR9 mRNA表达均上调。TLR3及TLR4激动剂刺激下,补肾冲剂组细胞上清中的HBsAg和HBeAg分泌均下降,IFN-β以及TNF-α mRMA表达增加,且IRF-3表达明显高于对照组。TLR7及TLR9激动剂刺激下,补肾冲剂组IRF-7表达明显高于对照组。2. 补肾冲剂组RLRs中RIG-I受体、MDA5受体mRNA表达上调。8h时,加入聚肌胞的补肾冲剂药物血清组MAVs表达最高,且其pIRF-3为最高。3.补肾冲剂组NLRs中,NOD1 mRNA、NOD2受体mRNA、NLRC4 mRNA表达上调。NLRPs mRNA检测发现,补肾冲剂组NLRP1、NLRP2、NLRP10和 NLRP11mRNA表达上调,NLRP3 mRNA表达显著下调。NOD2受体激动剂刺激下,补肾方药物血清组IFN-β以及TNF-α mRMA均上调。研究结论1. 补肾冲剂可以上调TLR(3、4、5、7、9、)、RIG-I、MDA5、 NLRP(4、10、11、12)、NOD(1、2)、ZBP1、NLRC4 mRNA表达,下调TLR6、NLRP(1、2、3)、LPG2 mRNA表达;2.模式识别受体激动剂刺激下,补肾冲剂能抑制HepG2.215细胞HBsAg、HBeAg的分泌,并且上调其IFN-β、TNF-α mRNA的表达,且上调TLR(3、4、7、9)、NOD2、RIG-I介导的I型干扰素信号通路干扰素调节因子(IRF-3/7、MAVS)的表达,并促进其磷酸化,下调NLRP3介导的IL-1β的表达。本项目共发表论文22篇,其中SCI论文5篇;获得省部级科研奖励5项;共培养硕士研究生1名。