限制性内切酶Sau3AI 识别GATC序列并酶切DNA 链,本项目通过在大肠杆菌中表达、提纯、结晶Sau3AI C端30KD 片段蛋白质(Sau3AI-C)及全长蛋白,利用硒代甲硫氨酸和多波长异常散射(MAD)方法解析出了1.9埃的Sau3AI-C结构及2.8埃的Sau3AI 全长结构。Sau3AI-C为一个与DNA错配修复蛋白MutH相似的结构,研究表明该片段含有一个识别并结合GATC的位点,该位点不能酶切DNA,但在酶切过程中起着辅助的作用。全长Sau3AI的结构由两个MutH相似片段组成,显示为假的二聚体,单体在N端(Sau3AI-N)有一个结合并酶切GATC序列的活性位点。结构提示Sau3AI首先在C端结合一个含GATC序列的DNA,并通过构象变化开放N端的活性位点,使得Sau3AI-N结合目的DNA并完成酶切。本项目中Sau3AI-C及Sau3AI全长结构和功能的研究,为进一步研究Sau3AI-DNA 复合物的结晶与结构,以及为针对相关机制的药物设计提供了坚实的基础。
英文主题词Sau3AI ; restriction enzyme; crystallography; X-ray diffraction